蓝布正水提物及没食子酸抗环磷酰胺致AML12肝细胞损伤的保护作用研究

发布时间：2020-05-30 08:24

【摘要】：目的:基于代谢组学等研究蓝布正水提物及没食子酸抗环磷酰胺(CP)致AML12细胞损伤的保护效应及作用机制。方法:建立高效液相色谱法同时测定蓝布正药材中没食子酸和鞣花酸含量的方法,并对方法学进行验证。建立CP致AML12细胞损伤模型并探讨蓝布正水提物及没食子酸对细胞存活率的影响;再从细胞形态观察、肝功酶、抗凋亡、抗氧化研究蓝布正水提取物及没食子酸对AML12细胞损伤模型的综合保护效应;采用实时荧光定量核酸扩增检测(RT-qPCR)、蛋白印迹法(WB)研究蓝布正水提物及没食子酸对氧化和凋亡相关基因的表达的影响。建立反相高效液相色谱-串联质谱(RPLC-MS/MS)分析肝细胞破碎液的代谢组学方法,对不同组别进行代谢轮廓分析,模式识别差异代谢物,分析其关联的代谢通路来初步阐释其作用机制。结果:建立了同时测定蓝布正药材中没食子酸和鞣花酸的含量的方法,线性、仪器精密度、方法重复性、24 h内稳定性均良好、准确度高。6批药材测得没食子酸和鞣花酸的平均含量分别为0.033%、0.192%。与正常对照组相比,CP模型组AML12细胞存活率明显下降;ALT、AST、LDH肝功酶含量显著升高(P0.05);细胞凋亡显著增加(P0.05);SOD、MDA含量显著升高(P0.05),GSH含量显著降低(P0.05)。与CP模型组相比,蓝布正水提物和没食子酸给药后,可提高AML12细胞存活率;降低了细胞上清中的ALT、AST、LDH含量;抑制AML12细胞凋亡(P0.05);升高了细胞破碎液中SOD、GSH含量水平(P0.05),降低了MDA含量水平(P0.05)。在代谢组学分析中,本研究发现蓝布正水提物调节Niflumic acid、Palmitoylethanolamide、4-oxo-Retinoic acid等6个代谢物,主要涉及氨基酸代谢和花生四烯酸代谢。没食子酸主要调节L-Threo-3-Phenylserine、L-Leucine、Met His Lys等17个代谢物,主要涉及氨基酸代谢、磷脂代谢、鞘脂代谢等代谢通路。RT-qPCR法测定凋亡和氧化应激基因,与正常对照组相比,CP模型组Bad、Bax、caspase3、caspase9、P53的m RNA水平明显上调(P0.05),Bcl-2、Keap1、Nqo1的mRNA水平下调(P0.05);与CP模型组相比,蓝布正水提物及没食子酸干预后可下调Bad、Bax、caspase3、caspase9、P53的mRNA水平(P0.05),升高Bcl-2、HO-1、Keap1、Nqo1、Nrf-2的mRNA水(P0.05)。同时WB法测定结果中,与正常对照组相比,CP模型组Bax的蛋白水平上调(P0.05),Bcl-2的蛋白水平明显下调(P0.05);与CP模型组相比,蓝布正水提物及没食子酸给药后可下调Bax的蛋白水平(P0.05),升高Bcl-2的蛋白水平(P0.05)。结论:蓝布正水提物和没食子酸可减轻CP致AML12细胞损伤,机制与改善细胞功能,减少细胞凋亡,抗氧化应激及调节细胞代谢网络等有关。
【图文】：

图 1-1 蓝布正供试品和蓝布正水提物 HPLCA.空白溶剂 B.对照品溶液 C.供试品溶液 D.蓝布正水提物供试品溶液 1.没食子酸 2.鞣花酸2.2 标准曲线的绘制以溶液质量浓度为横坐标（X）,峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得到的线性回归方程为：Y没食子酸=11.703X-2.012（r=0.9999），Y鞣花酸=15.033X-32.982（r=0.9995）。结果表明没食子酸和鞣花酸分别在 2.41~54.11，5.28~118.69 μg/mL 呈良好的线性。

图 1-2 没食子酸和鞣花酸标准曲线A.没食子酸 B.鞣花酸2.3 精密度试验如表 1-1，没食子酸、鞣花酸峰面积的 RSD 分别为 1.44%、1.29%，表明仪器精密度良好。表 1-1 没食子酸和鞣花酸精密度的考察结果序号 没食子酸峰面积 鞣花酸峰面积1 633.10 1769.802 649.10 1778.403 652.50 1758.404 652.20 1782.205 635.10 1721.60
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2687865