光炭轮菌菌丝体及一株冬虫夏草内生菌赫克青霉菌的化学成分研究

发布时间：2020-05-30 22:16

【摘要】：本论文主要由两部分组成。第一部分为对大型高等真菌光炭轮菌(Daldinia eschscholtzii)菌丝体进行化学成分研究。第二部分为对冬虫夏草中一株内生菌赫克青霉菌(Penicillium herquei)的次级代谢产物进行化学成分研究。第一部分:为了探究光炭轮菌菌丝体中所含的化学成分,即寻求更多结构新颖、活性良好的化合物,本论文针对一株大型高等真菌D.eschscholtzii,对其进行液体发酵培养,并对其菌丝体进行化学成分研究。本论文利用微生物学手段将采集并鉴定的光炭轮菌接种至固体培养基,并对菌种进行放大液体发酵,得到实验所用全部菌丝体;再运用化学手段,通过溶剂萃取、柱色谱、薄层色谱、制备色谱等方法,对菌丝体的化学成分进行提取分离;对得到的单体化合物,采用NMR、MS等波谱手段对其结构进行鉴定;再采用MTT法对所得到的化合物进行细胞毒活性测试。实验分离鉴定了7个化合物,分别为:(E)-6-(3-壬烯基)-2H-吡喃-2-酮((E)-6-(non-3-en-1-yl)-2H-pyran-2-one)(DE-1)、(R)-5-羟基-8-甲氧基-2-甲基4-色原酮((R)-5-hydroxy-8-methoxy-2-methylchroman-4-one)(DE-2)、4,6,8(14),22-四烯-3-麦角甾酮(ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one)(DE-3)、5-甲氧基香豆素(5-methoxycoumarin)(DE-4)、5-羟基-2-甲基-4-色原酮(5-hydroxy-2-methyl-4H-chromen-4-one)(DE-5)、3,4-二氢-5-甲氧基-2-甲基苯并二氢吡喃酮(3,4-dihydro-5-methoxy-2-methyl-2H-1-benzopyran-4-ol)(DE-6)、5-甲氧基-2-甲基二氢色原酮(2,3-dihydro-5-methoxy-2-methylchromen-4-one)(DE-7)。分离得到的化合物中包括色原酮类化合物4个,香豆素类化合物1个,麦角甾类化合物1个,吡喃酮类化合物1个,其中化合物DE-1、DE-2为新化合物。细胞毒活性测定结果表明化合物DE-3对癌细胞株H1299、H460、HGC-27、A549和MNK-45均表现出较弱的细胞毒活性,IC_(50)值分别为25.2±2.9μmol/L、32.3±4.2μmol/L、29.2±1.2μmol/L、33.9±3.7μmol/L、18.0±7.0μmol/L。第二部分:为了进一步开发冬虫夏草的药用价值,也为冬虫夏草的资源合理利用提供新的思路,考虑到植物内生真菌种类庞大,次级代谢产物种类繁多、结构多样新颖,能为获得更多活性成分提供又一途径。本论文对从冬虫夏草中分离得到的一株内生菌P.herquei,对其液体发酵后得到的次级代谢产物乙酸乙酯萃取部位进行化学成分研究。本论文运用微生物学手段,对新鲜采挖的冬虫夏草进行目标内生菌纯化分离,再对目标内生菌进行液体发酵培养;随后再利用溶剂萃取、柱色谱、薄层色谱、制备色谱等方法,对发酵液进行提取分离;对得到的化学成分,采用NMR、MS、ECD计算等手段对其进行结构鉴定。我们从冬虫夏草内生菌P.herquei发酵液中共分离得到14个化合物,经结构鉴定,它们分别为:(S)-6-(仲丁基)-5-(羟甲基)-4-甲氧基-2H-吡喃-2-酮((S)-6-(s ec-butyl)-5-(hydroxymethyl)-4-methoxy-2H-pyran-2-one)(PH-1)、(5S,7R)-7-乙基-4,5-二甲氧基-7-甲基-5,7-二氢-2H-呋喃并[3,4-b]吡喃-2酮((5S,7R)-7-ethyl-4,5-dimethoxy-7-methyl-5,7-dihydro-2H-furo[3,4-b]pyran-2-one)(PH-2)、(5R,7R)-7-乙基-4,5-二甲氧基-7-甲基-5,7-二氢-2H-呋喃并[3,4-b]吡喃-2酮((5R,7R)-7-ethyl-4,5-dimethoxy-7-methyl-5,7-dihydro-2H-furo[3,4-b]pyran-2-one)(PH-3)、2',4'-二羟基-3',5'-二甲基苯乙酮(2',4'-dihydroxy-3',5'-dimethylacetophenone)(PH-4)、香草醛(vanillin)(PH-5)、3-氧代-α-紫罗兰酮(3-oxo-α-ionone)(PH-6)、3,3,5-三甲基-4-(3-氧代-1-丁烯基)-1-环己酮(3,3,5-trimethyl-4-(3-oxobut-1-en-1-yl)cyclohexan-1-one)(PH-7)、对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde)(PH-8)、对羟基苯乙酮(p-hydroxyacetophenone)(PH-9)、对羟基苯乙酸甲酯(methyl p-hydroxyphenylacetate)(PH-10)、环(脯氨酸-异亮氨酸)(cyclo-(Pro-Ile))(PH-11)、环(脯氨酸-缬氨酸)(cyclo-(Pro-Val))(PH-12)、4-甲氧基苯乙酸(4-methoxyphenylacetic acid)(PH-13)、环(4-甲基脯氨酸-缬氨酸)(cyclo-(4-methyl-Pro-Val))(PH-14)。分离得到的化合物中包括苯乙酮及其衍生物4个,环二肽类化合物3个,吡喃酮及其衍生物3个,紫罗兰酮类化合物2个,苯甲醛类化合物2个,其中化合物PH-1、PH-2、PH-3为新化合物。
【图文】：

流程图,流程图

13图 2 光炭轮菌菌丝体的化学成分分离流程图Fig. 2 Isolation process flow chart of chemical constituents from D. eschscholtzii

菌丝体,化学成分,部位,色原酮

图 3 光炭轮菌菌丝体乙酸乙酯萃取部位化学成分Fig. 3 Chemical constituents from ethyl acetate extract of D. eschscholtzii mycelia构鉴定论文从光炭轮菌菌丝体的乙酸乙酯萃取部位中共分离得到 7 个纯化谱学手段，对它们进行结构鉴定，确定了 2 个新化合物：一个为吡：(E)-6-(3-壬烯基)-2H-吡喃-2-酮（DE-1）、一个为色原酮类化合-8-甲氧基-2-甲基 4-色原酮（DE-2）；另外还有 3 个色原酮类化合-甲基-4-色原酮（DE-5）、3,4-二氢-5-甲氧基-2-甲基苯并二氢吡喃5-甲氧基-2-甲基二氢色原酮（DE-7）；1 个香豆素类化合物：5-甲DE-4）；1 个麦角甾类化合物：4,6,8(14),22-四烯-3-麦角甾酮（DE合物 DE-1
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284.1

【参考文献】