全蝎提取物的促细胞融合作用初探

发布时间：2020-05-31 04:59

【摘要】：全蝎作为中药组分,在治疗惊厥、抽搐痉挛、癫痫等症方面历史已久,但至今人们对其药效组分及药效机理仍知之甚少。又由于中药地道性受特定自然条件和生态环境等因素影响,因此不同地理条件下所产之全蝎中所含的药效组分种类及含量可能亦会有所不同。陕北黄土高原地理环境独特,历来为我省地道中药产区之一。基于此,本论文以全蝎不同组分含量、不同溶剂提取物促细胞融合效应等为切入点,通过对全蝎提取物促细胞融合作用及机制的研究,窥视中药全蝎的部分细胞水平作用机制,为进一步阐明其药效机理提供有力的实验支撑。主要研究内容及结果如下:(1)全蝎组分测定野生活全蝎经冻杀,干燥,分部分组(全蝎、全蝎去尾、全蝎尾、雌蝎、雄蝎、雌雄混合)粉碎并称重。结果显示,全蝎尾部占全蝎总体重的质量百分比约为7%,混合全蝎野生活蝎重量为11.987g,经过清洗三次,冷冻干燥后,重量降低为4.959g。ICP-AES法测定全蝎中金属元素含量结果表明,K元素含量最丰富,其中混合全蝎达0.095263mg/mg。Cu元素含量最少,其中混合全蝎去尾仅为0.000263mg/mg。推测全蝎体内可能含有某种金属蛋白酶,在金属蛋白酶的作用下发挥一定的促进细胞融合作用。考马斯亮蓝法测定全蝎水溶性蛋白的含量,结果显示,全蝎,全蝎去尾,全蝎尾中蛋白质含量分别为14.98%、17.92%和13.04%。索氏提取法提取全蝎粗脂肪含量表明,全蝎,全蝎去尾,全蝎尾中粗脂肪含量分别为4.10%,4.32及1.83%,提示全蝎脂肪主要集中在其躯干部位。(2)全蝎水提物、醇提物促鸡血细胞融合作用及机制不同浓度的全蝎水提物分别作用于急性分离的鸡血细胞不同时间后,雌雄混合去尾组在高浓度(150μg/μl)下,7 min时出现了大量的三核细胞。雌雄混合全蝎尾组中可明显看到,随着给药浓度的增加,双核融合细胞数量达最高值的时间提前。雄性全蝎对鸡血细胞的融合作用较为温和,促融合效率没有雌性组显著。水提物作用下,死亡细胞较少。三核细胞主要在高浓度组20至30 min时出现。醇提物对鸡血细胞的促融合作用实验表明,雌雄混合全蝎的醇提物促融作用较为缓慢,且随着作用时间延长而出现死亡细胞。雌雄混合全蝎尾的醇提物促融合效率随着作用时间及浓度的增加而提高,且其后期死亡细胞数量也较少。就雄蝎组而言,雄性全蝎去尾醇提物的促融合作用最为显著。在雌蝎组中,雌性全蝎与雌性全蝎去尾醇提物均表现出较强的促血细胞融合作用,特别是低浓度雌性全蝎去尾醇提物即可促细胞融合为三核细胞。而雌性全蝎尾醇提物低浓度下作用血细胞10 min便可观察到融合的三核细胞,表现出很强的促细胞融合作用。综上认为,全蝎水溶液提取物与50%乙醇溶液提取物对鸡血细胞的促融合作用显著,并且促融合速率与浓度和时间呈正相关。(3)全蝎仿生酶解提取物促鸡血细胞融合作用及机制全蝎胃蛋白酶酶解液提取物的促细胞融合实验表明,雌雄混合全蝎的胃蛋白酶酶解液作用于鸡血细胞不同时间,混合全蝎去尾与混合全蝎(对应各个浓度)相比,混合全蝎去尾促进鸡血细胞融合能力较强。并且混合全蝎去尾在中浓度和高浓度下,7至30 min时,三核细胞数量要明显高于混合全蝎全体。在混合全蝎尾中,各个浓度下促鸡血细胞融合作用明显,并且死亡细胞数量较少。雄性全体促鸡血细胞的融合变化中,高浓度的变化较为明显。雄性全蝎去尾中浓度在7 min时出现了较多的三核细胞。在雄性全蝎尾中,低浓度随着时间的推移,融合率明显增加。在雄性中,出现死亡细胞的数量较少。在雌性全蝎中,细胞融合率相比混合与雄性均较好。在雌性全蝎去尾中浓度10至30 min出现了三核细胞。在雌性全蝎尾低浓度20至30 min时出现了死亡细胞。全蝎胰蛋白酶酶解液提取物的促细胞融合实验结果显示,全蝎的全体和全蝎去尾各个浓度及性别组在10至30 min时均出现了大量的死亡细胞。只有全蝎的尾部保留了良好的促细胞融合的作用。综上认为,全蝎胃蛋白酶酶解液提取物具有较强的促细胞融合作用,而其胰蛋白酶酶解液提取物中,只有全蝎尾提取物对鸡血细胞具有促细胞融合作用。
【图文】：

全蝎,电感耦合等离子体发射光谱,不同性别,金属元素

图 2-1 全蝎按照不同性别及处理方法的分组2.3 全蝎金属元素的测定测定全蝎的金属元素采用电感耦合等离子体发射光谱（ICP-AES）法测2.3.1 全蝎粉末的湿消解法处理称取上述各处理粉碎样品 2g(称取范围 0.5~2g)于 200 mL 洁净的带塞磨瓶中，，加入 5 mL 浓硝酸，放置于电热套蒸至近干。待冷却后补加 5 mL 浓硝续于电热套上消解，直至发生棕色烟雾，开始冒白烟为止。待其冷却后加入 1盐酸和 5 mL 浓硝酸液，再置于电热套上加热至呈白色并开始冒浓烟为止。却后，加入 4 mL6N 盐酸再继续加热 30 min。取下当温度降至室温后移入 5量瓶中用 0.5%硝酸定容至刻度，混匀备用[33]。2.3.2 制备标准溶液并绘制标准曲线将准备好的标准待测金属的硫酸盐分为重金属和过渡金属。重金属包括Cu和Zn，过渡金属包括Na，Mg和K。按照表1所示各自配置5个不同浓度梯

曲线,含量标准,曲线,曲线图

钠、钾含量的标准曲线
【学位授予单位】：延安大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】