雷公藤红素靶向双糖链蛋白聚糖Biglycan诱导胃癌细胞发生程序性坏死机制研究

发布时间：2020-05-31 12:07

【摘要】：背景胃癌是最常见的癌症之一,对于晚期胃癌的患者而言,化疗是最常见治疗方案,然而,化疗中凋亡抵抗的出现是治疗的重要障碍,使得非凋亡机制如程序性坏死在抗肿瘤中的作用备受关注。研究发现,富含小亮氨酸的双糖链蛋白聚糖Biglycan(BGN)在多种肿瘤中异常高表达,与肿瘤的迁移和侵袭密切相关。雷公藤红素是雷公藤中获取的三萜烯醇类化合物,能够诱导细胞凋亡来产生抗肿瘤活性。但是,目前雷公藤红素能否诱导胃癌细胞发生程序性坏死以及在此过程中是否影响Biglycan的表达仍未见报道。基于以上背景,我们提出假设,雷公藤红素可能通过调控Biglycan的水平诱导胃癌细胞发生程序性坏死。因此,在本研究中,我们深入研究了雷公藤红素诱导胃癌细胞AGS及HGC-27发生程序性坏死的抗肿瘤作用,进一步探究了Biglycan在此过程中的作用及分子机制。我们的研究结果为基于Biglycan表达和程序性坏死的新的个性化抗肿瘤治疗提供思路和策略。目的1.研究雷公藤红素诱导胃癌细胞发生程序性坏死的抗肿瘤作用;2.研究Biglycan在雷公藤红素诱导胃癌细胞程序性坏死中的作用及可能的分子机制。方法1.雷公藤红素对胃癌细胞程序性坏死的影响利用MTT实验分析雷公藤红素对胃癌细胞存活率的影响;利用流式细胞术及Western blot实验分析雷公藤红素对胃癌细胞死亡率及程序性坏死信号的影响。2.雷公藤红素靶向调控Biglycan涉及胃癌细胞程序性坏死利用Western blot检测雷公藤红素处理后胃癌细胞中Biglycan的表达变化;慢病毒过表达Biglycan后western blot检测其过表达情况;MTT法、形态观察结合流式细胞技术分析过表达Biglycan对雷公藤红素诱导的胃癌细胞程序性坏死的影响。3.Biglycan调控雷公藤红素诱导胃癌细胞发生程序性坏死的分子机制结合慢病毒过表达Biglycan,利用Western Blot、免疫荧光等方法,选用程序性坏死抑制剂Nec-1、NSA,分析上调Biglycan对雷公藤红素暴露后胃癌细胞程序性坏死分子RIP1、RIP3及下游信号MLKL的影响;探究抑制程序性坏死对胃癌细胞中雷公藤红素调控Biglycan的干预作用。结果1.通过MTT、流式细胞技术和Western blot实验,研究发现随着雷公藤红素以浓度依赖方式降低胃癌细胞HGC-27及AGS的存活率,同时增加细胞死亡率,促进程序性坏死信号RIP1及RIP3的表达;2.通过Western blot、MTT、形态学观察实验,研究发现在胃癌细胞中随着雷公藤红素处理剂量增加,Biglycan的表达呈现浓度依赖性降低。过表达Biglycan能够阻断雷公藤红素诱导的胃癌细胞程序性坏死发生;3.通过流式细胞技术、Western Blot、免疫荧光以及联合程序性坏死抑制剂Nec-1和NSA,研究发现在胃癌细胞中,Biglycan能够有效阻断雷公藤红素诱导的程序性坏死信号RIP1、RIP3的激活及MLKL由细胞质向细胞膜的转位。程序性坏死抑制剂Nec-1联合Biglycan能够双重拮抗雷公藤红素的抗胃癌作用。结论1.雷公藤红素能够诱导胃癌细胞发生程序性坏死;2.雷公藤红素通过下调Biglycan促进胃癌细胞程序性坏死;3.过表达Biglycan能够抑制雷公藤红素激活的程序性坏死信号RIP1、RIP3及MLKL的转位进而阻断胃癌细胞坏死。
【图文】：

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素诱导胃癌细胞发生程序性坏死降低胃癌细胞 HGC-27 和 AGS 的细胞活力明确雷公藤红素对正常胃细胞的活力是否有影响，我们在度（0.25 μM，0.5 μM，1 μM，2 μM）雷公藤红素及 DMS 1 所示，与对照组相比，雷公藤红素 0-1 μM 范围内，细公藤红素达到 2 μM 时，胃细胞活力表现为显著降低。

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图 2 雷公藤红素对 HGC-27 和 AGS 细胞活力的影响Figure 2 Effect of celastrol on the viability of HGC-27 and AGS cells图 2：雷公藤红素能够降低 HGC-27 和 AGS 细胞的活力。不同浓度（0，0.25 μM，0.5 μM2 μM）的雷公藤红素处理细胞 24 h。MTT 检测 HGC-27 (A) 和 AGS (B)的细胞活力。*and *P < 0.5。Figure 2 The viability of HGC-27 and AGS cells were reduced by Celastrol. Cells were tredifferent concentrations (0, 0.25 μM, 0.5 μM, 1 μM, 2 μM) of celastrol for 24 h. The cells vHGC-27 (A) and AGS (B) were detected by MTT assay. Error bar indicated SD of celastrol three independent experiments. Student’s t test, **P < 0.01 and *P < 0.5.2.1.2 雷公藤红素使胃癌细胞 HGC-27 和 AGS 的死亡率升高为了进一步确认雷公藤红素对胃癌细胞 HGC-27 和 AGS 死亡的影响，，用 PI 染色结合流式细胞仪技术，检测了雷公藤红素对细胞死亡的影响。流式
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】