小建中汤抗疲劳作用与机制的实验研究

发布时间：2020-06-03 20:20

【摘要】：疲劳是现代社会常见的生理现象。疲劳可由过度劳累产生,也可无明显诱因而产生。疲劳日久得不到及时恢复,可导致多种慢性疾病,危害人体健康。研究者从不同方面认识疲劳产生的原因,据此形成了几种不同学说,本研究与其中衰竭学说、堵塞学说和自由基学说有关。现阶段中医对疲劳的治疗开始重视调和,不再强调疲劳的产生为纯虚致病,渐渐走出一味进补的误区。本实验在《金匮要略·血痹虚劳病》篇对虚劳病的理解和治疗的理论基础上,选用治疗体劳的小建中汤,讨论其调和阴阳法抗疲劳的实质,通过实验研究探究其抗疲劳的作用机制。目的:1.通过动物实验,建立力竭模型,探讨其在机体能量代谢和抗脂质过氧化方面的促进作用,明确小建中汤对糖脂代谢的影响;2.通过免疫印迹试验,观察小建中汤对疲劳模型小鼠氧化应激反应情况,探讨其在Keap1-Nrf2-ARE信号传导通路中的作用。方法:将40只小鼠随机分为空白组(N组)、模型组(C组)和小建中汤低剂量组(SL组)、小建中汤中剂量组(SM组)、小建中汤高剂量组(SH组),每组8只。C组和SL、SM、SH组分别进行持续10天的负重力竭游泳实验(力竭标准:小鼠在水中旋转,动作协调性明显下降,水淹没鼻尖,身体下沉,至再次浮出水面的时间超10s,被提起后头不能抬起),并按照200mg·kg~(-1)·d~(-1)剂量分别灌服生理盐水和相应剂量的小建中汤汤剂。第10天后各组进行负重游泳,力竭后眼球取血处死小鼠,解剖取材并进行指标测定。测定各组小鼠负重游泳时间;采用比色法检测血清尿素(UREA)、肌酐(CREA)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,以及肌肉谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌糖原(GLY);采用Western-blot方法测定各组对小鼠股四头肌Keap1、Nrf2,以及GAPDH的蛋白表达。结果:1.小建中汤能显著提高小鼠游泳时间(p0.05),提升小鼠运动耐力;2.运动后C组小鼠UREA、CREA、LDH含量较N组均有显著提高(p0.05),说明运动后体内蛋白质代谢分解产物增加,代谢产物堆积,认为疲劳状态已经造成。与C组相比,SL组UREA含量显著下降(p0.01),SM组UREA含量下降具有统计学差异(p0.05);SL组CREA含量对比C组显著下降(p0.01)、SM组CREA含量下降(p0.05);SM组LDH含量对比C组显著提升(p0.01),SH组LDH含量提升(p0.05);SH组UREA含量、SH组CREA含量、SM组LDH含量对比C组无显著性差异(p0.05),表明小建中低、中剂量能更好清除体内代谢产物,提高机体能量代谢。3.运动后C组小鼠GSH-Px、GLY含量对比N组显著降低(p0.01),C组SOD含量下降、MDA含量上升(p0.05),表明体内自由基及脂质过氧化产物增加,体内能量物质减少。与C组相比,SL、SH组GSH-Px含量上升(p0.05);SH组SOD含量显著上升(p0.05);SL、SM组MDA含量显著下降(p0.01),SH组含量(p0.05);SM组GLY含量显著提升(p0.01);SM组GSH-Px含量,SL、SM组SOD含量,SL、SH组GLY含量对比C组无统计学意义(p0.05)。说明小建中汤低、高剂量能促进机体抗氧化酶的生成,减少过氧化产物的堆积,但并不能提供能量物质。4.运动后C组小鼠Keap1蛋白表达量较N组上升(P0.05),C组相比,SL、SH组Keap1蛋白表达量显著降低(P0.05),其中SL组差异显著(p0.01),SM组与C组相比无显著性差异(p0.05);C组Nrf2蛋白表达量较N组下降(p0.05),与C组相比,SL、SM、SH组Nrf2蛋白表达量均有所提高(p0.05)。说明小建中汤在低、高剂量下更能Keap1与下游蛋白解离,激活Nrf2蛋白进入细胞核中与ARE结合以激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路,结合结果3,说明小建中汤能有效对抗机体氧化应激反应。结论:研究结果证实小建中汤能够显著提高小鼠运动耐力;能够改善机体能量代谢,加快血清代谢产物的清除,促进糖酵解过程;能够减少导致疲劳产生的氧化产物并且参与Keap1-Nrf2-ARE信号通路,激活相关抗氧化蛋白酶,清除体内多余自由基,防止或减缓脂质过氧化,从而减轻疲劳产生的不良影响,具有抗疲劳功能。
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】