基于“病证—效应—生物样本分析”方法的炮姜温经止血药效及其归经研究

发布时间：2020-06-06 02:18

【摘要】：目的:观察炮姜水煎液对虚寒性出血大鼠模型温经止血的药效,阐明其温经止血的物质基础,通过观察其指标成分虚寒性出血大鼠模型体内的代谢分布,讨论炮姜的归经。方法:1炮姜对脾胃虚寒出血证大鼠止血药理作用观察与温中止血功效物质研究:SD雄性大鼠72只随机分成6组,每组12只。分别为模型组,阳性对照组,炮姜水煎液高、中、低剂量组以及空白对照组。第一天除空白对照组外,其余各组50%乙醇1ml/100g灌胃,空白对照组灌饮用水。第一天起每日观察大鼠体重、大便性状及便血指证并每天测量动物体温。模型组、高低剂量组上午灌胃4℃的食醋每只1ml/100g,连续灌胃10天。在第7天给予模型组大鼠0.6mg/100g消炎痛,灌胃处理。后7天每天下午给药组(高低剂量、正常给药组)分别灌胃相应的药物。第14天解剖,观察胃、小肠病理变化,观察黏膜损害程度,做病理切片观察其病理改变。末次给药60分钟后采集血清、脏腑组织进行化学分析。用新鲜全血进行ELisa试剂盒胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)检测,凝血四项指标,包括凝血酶原时间(prothrombin time,PT),活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT),凝血酶时间(thrombin time,TT),以及血浆纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)等各项指标进测试,并将脏器组织进行HPLC分析,与药材及标品HPLC对照,研究炮姜进入脏器组织的功效物质、成分代谢产物等,认识炮姜温中止血的药效物质及其归经。2炮姜对虚寒性子宫出血证大鼠止血药理作用观察与温经止血功效物质研究:将健康未孕的雌鼠100只与50只雄鼠于17:00时按2:1的比例合笼,次日上午8:00进行阴道检查,以雌鼠阴部发现阴栓为妊娠第1天,取受孕大鼠60只,随机分为5组,每组12只,分别为模型组,阳性对照组,炮姜高、中、低剂量组,以及12只正常雌鼠为空白对照组。于第7天分别灌胃米非司酮(8∶00)和米索前列醇(18∶00),同时于阴道内置入定量棉球一个,每日于8∶00和18∶00将棉球取出,,同时放置一个新的定量棉球于大鼠阴道内,连续14天观察阴道出血情况,米非司酮配伍米索前列醇灌胃早孕大鼠,可致早孕大鼠不全流产。除正常对照组外,其余各组动物均按上述方法造模。在大鼠平时饮用水中并放入适量冰块,冷冻大鼠饲料,以此造成大鼠虚寒性症状,造模成功后,于造模第8日各组动物开始ig给药,每天1次,连续7d。观察其对子宫出血的治疗作用,第14天,末次给药后1h,取血及各组织,处死大鼠,将每日收集的每鼠阴道棉球进行出血量测定。用新鲜全血测定四项凝血指标PT、APTT、TT、FIB。各脏器称重,各组大鼠子宫做病理切片进行分析比较。结果:1本次实验所制备的模型脾胃虚寒出血证大鼠均出现了体重减轻,饮食量减少,被毛发黄稀少,有柏油样大便,以及大便黏滞污浊,腹部肿胀,精神倦怠,模型组大鼠血清中的MTL、GAS测定值,以及凝血四项指数均明显延长,这与临床中脾胃虚寒性出血的表现基本相一致,模型组胃大小肠也出现了相应的炎症及出血情况且组内比重偏高。给药后,对比模型组,各模型给药组大鼠的饮食量和体重明显增加,柏油样黑便现象明显减少,体重由下降变为缓慢增长,凝血时间显著缩短,精神较之前喜动,症状有了明显改善。胃动素、胃泌素含量显著升高,脾胃虚寒症状有所改善。便隐血现象逐渐减少,凝血四项指标显著改善,出血症状有所缓解,病理组织较模型组完好,病理改变轻且浅,有恢复空白对照组织的倾向。因此,本实验初步证明炮姜对于虚寒性出血具有治疗作用。2虚寒性子宫出血模型组大鼠形体较空白对照组明显体重偏轻,身体瘦弱,被毛干枯,皮肤苍白无血色,精神倦怠,大便黏滞质稀,体温较低,宫温偏高,饮食量减少,体重增长慢,捉持时无力,每日出血量偏多且出血时间长,凝血时间明显延长,凝血四项数值较空白对照组偏高,表明子宫虚寒出血模型制备成功。模型组中存在崩漏下血大鼠,出血量异常,死亡率高,也存在雌鼠淋漓不尽,点滴出血不止,子宫出血迁延不愈时间较别的造模组比较明显偏长。炮姜各剂量组在给药后上述情况均有所改善,饮食量逐渐增加,体重增长加快,毛色逐渐有光泽,皮肤逐渐出现血色,出血量较模型组少,出血凝血时间缩短。由此可见炮姜可以明显改善虚寒性子宫出血的症状,炮姜确实具有温经止血的疗效,因此可以应用于虚寒性子宫出血证。结论:1炮姜药效实验中,炮姜具有良好的温经止血药效,能够有效改善模型组大鼠所表现出的虚寒性出血症状。2炮姜温中止血物质基础研究及其组织分布实验中,建立HPLC的方法测定血清中所含炮姜的药效物质基础,结果发现姜酮、6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚,说明此六种成分为炮姜温经止血药效物质基础。结合药动学参数观察炮姜这六种代表性成分在脾胃虚寒大鼠体内的分布,炮姜中姜辣素的姜酮、6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚这六种成分,在肝、脾、胃、小肠的选择性是很高的,尤其是脾和肝,由此可以猜测炮姜可能入脾、胃、肝经。
【图文】：

色谱图,姜酮,色谱图,归经

姜酮色谱图

色谱图,姜酚,色谱图,归经

-姜酚色谱图
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】