海带多糖基于SMP-30的抗肝癌作用

发布时间：2020-06-06 02:16

【摘要】：目的:探讨海带多糖基于肝癌相关抗原SMP-30的抗肝癌作用及其机制,为肝癌的防治以及海带特产资源的开发利用提供有价值的参考资料。方法:(1)取对数生长期的人肝癌细胞株(Bel-7404和HepG2),每孔接种5×10~3个细胞于96孔培养板中,培养24h后弃上清,设浓度为5、10、15、20、25、30、35、40mg/mL的海带多糖组,以不加海带多糖干预的Bel-7404/HepG2细胞设为对照组,并以不含Bel-7404/HepG2细胞的DMEM培养液为空白组,每组设3个复孔。继续培养24h、48h、72h后,倒置显微镜下观察各组肝癌细胞的形态学改变,加入CCK-8试剂检测上述各组肝癌细胞的增殖抑制情况。(2)采用qRT-PCR和Western blot技术检测海带多糖对人正常肝细胞(LO2)和人肝癌细胞(Bel-7404/HepG2)中肝癌相关抗原SMP-30表达的影响。(3)以小鼠肝癌细胞Hepa 1-6构建肝癌移植瘤小鼠模型,将造模成功的C57BL/6小鼠随机分为4组:生理盐水组、海带多糖低浓度组(200 mg/kg·d)、海带多糖中浓度组(400 mg/kg·d)、海带多糖高浓度组(800 mg/kg·d),每组6只,定期尾静脉注射相应溶液,动态观察各组小鼠体重和肿瘤体积的变化情况。给药4周后结束实验,处死小鼠并取出肿瘤块,测量各组肿瘤大小并称重,计算各组的抑瘤率。结果:(1)通过倒置显微镜观察发现对照组Bel-7404/HepG2细胞生长状态良好,而不同浓度海带多糖作用24h、48h、72h后,Bel-7404/HepG2细胞体积逐渐变小、固缩变形,其中35mg/mL组的细胞变形最明显。CCK-8结果显示,海带多糖对Bel-7404/HepG2细胞的增殖有抑制作用,且与海带多糖剂量呈正相关。其中浓度为35mg/mL的海带多糖对Bel-7404/HepG2细胞作用72h后,增殖的抑制作用最明显,抑制率分别为89%和87%。各组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05),证明海带多糖对肝癌细胞增殖抑制的最佳浓度为35mg/mL,最佳作用时间为72h。(2)qRT-PCR结果显示,经浓度为35mg/mL的海带多糖处理72h后的Bel-7404/HepG2细胞中SMP-30的表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05),说明海带多糖能增加肝癌细胞中SMP-30的表达;同时,我们还发现,经浓度为35mg/mL的海带多糖处理后各组细胞SMP-30的增长率分别为:正常肝细胞LO2组(100%)、人肝癌细胞Bel-7404组(161%)、人肝癌细胞HepG2组(128%),差异具有统计学差异(P0.05),说明海带多糖对人肝癌细胞Bel-7404的作用效果最明显。Western blot检测结果显示,经过35mg/mL海带多糖作用后,Bel-7404/HepG2细胞中SMP-30蛋白的表达量有所上升,均高于正常肝细胞LO2组,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)经过测量,以小鼠肝癌细胞Hepa 1-6构建的移植瘤小鼠在海带多糖治疗后体重均有所增加,且海带多糖浓度越高,小鼠增加的体重越大(P0.05);此外,随着海带多糖作用的时间越长、浓度越高,肿瘤生长的抑制作用越明显,其肿瘤体积越小、抑瘤率越高(P0.05)。结论:海带多糖具有抑制肝癌细胞生长的作用,通过上调肝癌相关抗原SMP-30可能是其作用机制中的一个途径。
【图文】：

结 果. 海带多糖对人肝癌 Bel-7404、HepG2 细胞增殖的抑制作1 海带多糖对人肝癌细胞形态的影响海带多糖作用 Bel-7404/HepG2 细胞 24h、48h、72h 后，细胞体增长逐渐变小、固缩变形，其中 35mg/mL 组的细胞变形最明显，如 2A。不同浓度海带多糖作用 72h 后用倒置显微镜观察，如图 1B、照组 Bel-7404/HepG2 细胞(a)生长状态良好。贴壁细胞多，轮廓胞间排列紧密。经海带多糖作用后（b-e），贴壁细胞随海带多糖大逐渐减少，细胞变形越明显。

海带多糖基于 SMP-30 的抗肝癌作 2018 届 硕 倍。igure 1 Morphological changes in Bel-7404 cells after LJP treatment. (A) a, b, corphological changes of Bel-7404 cells treated with 30 mg/mL LJP for 24 h, 48 h, and 72 h,) a shows the growth of Bel-7404 cells without LJP treatment in the control group; b owth of Bel-7404 cells treated with 5-, 10-, 20-, and 30-mg/mL LJP, respectively. The magn
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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本文编号：2698991