和厚朴酚抗金黄色葡萄球菌磷壁酸诱导的氧化损伤与炎症反应研究

发布时间：2020-06-06 00:27

【摘要】：金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)是肺炎和感染性休克的主要病源,其分泌的多种毒力因子可通过不同受体介导免疫系统。金葡菌细胞壁的组成成分——脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA),是其主要毒力因子之一,且与炎症反应有关。LTA作为一种聚甘油磷酸酯构成的两亲性物质,可以激活Toll样受体2(TLR2),并与脂多糖(LPS)表现出类似的炎症特征。LTA等多种威胁,能够导致活性氧(ROS)的显著产生,其中也包括羟基自由基以及其他自由基在内。机体出现氧化应激情况时,通常是由于促氧化剂和抗氧化剂之间的平衡遭到了破坏。超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)可消除氧化应激产生的ROS。和厚朴酚(honokiol,HNK)与厚朴酚互为异构体,是厚朴的有效成分之一,具有抗氧化、抗炎以及神经保护等多种生物活性。因此,本文就和厚朴酚对于金葡菌LTA诱导的氧化损伤及TLR2信号通路的影响进行了探究。本研究首先检测了和厚朴酚清除自由基的能力。进行了DPPH、ABTS~+·和O_2~-·自由基清除率实验,结果显示当和厚朴酚浓度为64μg/mL时,对三种自由基的清除率分别达94.57%、90.43%和91.24%,表明和厚朴酚有较强的清除自由基能力。T-AOC法测定总抗氧化能力实验结果显示,和厚朴酚浓度为16μg/mL、32μg/mL和64μg/mL时,总抗氧化值分别达到5.94 unit、7.62 unit和8.16 unit,表现出剂量相关性,表明和厚朴酚有较强抗氧化能力。其次,本文研究了和厚朴酚对LTA诱导造成的细胞多方面氧化损伤的抑制效果。通过荧光显微镜观察细胞内ROS水平,实验结果表明LTA的刺激大量增加了细胞内ROS含量,在和厚朴酚作用下ROS含量下降。此外,细胞内MDA含量,SOD、CAT以及GSH-Px三种抗氧化酶活力的检测实验表明,经和厚朴酚(32μg/mL)处理,与LTA组相比MDA含量下降了35.87%,三种抗氧化酶活力分别增至LTA组的1.54,2.91和3.17倍。Western blot检测结果表明和厚朴酚可提高三种抗氧化酶的活性,且能够抑制LTA刺激作用引起的抗氧化酶活性的下降。最后,本文研究了和厚朴酚对LTA诱发的细胞炎症反应的影响。western blot法检测了TLR2炎症通路蛋白表达水平,实验结果表明LTA刺激可被TLR2受体识别,进而激活MyD88和NF-κB及其下游蛋白的表达,最终引起炎症反应;不同浓度的和厚朴酚,可对LTA诱发的炎症反应发挥不同程度的抑制作用。利用ELISA法和qRT-PCR实验分别考察促炎性细胞因子和及其相关基因表达水平,结果显示在LTA的诱导下,细胞内促炎性因子水平显著增加,且导致炎性因子相关基因以及TLR2基因表达水平上调;经过和厚朴酚预处理的实验组,LTA引起的炎性因子产量增加和基因水平上调均受到了抑制作用,且与和厚朴酚剂量呈正相关。以上实验结果表明,和厚朴酚可抑制金葡菌磷壁酸诱导的氧化损伤及TLR2通路炎症反应,为和厚朴酚进一步被开发为安全天然且高效的保健品或药剂奠定了基础。
【图文】：

金葡菌,炎性因子

吉大学硕士学位论文活下游 NF-κB 的表达水平亦不同。有研究称[13]，金葡菌 LTA 可诱导细胞产生炎性因子，然而乳酸杆菌的 LTA 对此可发挥抑制作用。有科学家研究粪肠球 LTA 对细胞的影响[14]，，研究发现细胞受到 LTA 刺激作用后，胞内炎性因子不数量上剧增，种类也有所增加。除此之外，该研究证明了脂多糖（LPS）与 LTA者之间可互相促进，即表现出协同作用。

和厚朴酚,结构式,天然植物提取物

图 1.2 和厚朴酚结构式.2 constitutional formular of ho究者对于天然植物提取物产生]。在多年传统医学研究记载中肠不舒等疾病[33-36]。另有众多生物生长以及消除炎症等作用凋亡的作用，在大鼠模型研究在消化和血液系统中抗癌抗肿疗机制不尽相同[45-50]。由于和射和外敷等多种途径给药[51,5破，分别通过对细胞周期的调
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285

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