四逆软肝方对L02及LX-2细胞株增殖和凋亡的影响

发布时间：2020-06-05 23:46

【摘要】：目的:探究四逆软肝方对人正常肝细胞L02株和人肝星状细胞LX-2株增殖、凋亡以及蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的影响。方法:1取对数生长的L02和LX-2细胞,传至96孔板中培养,并分别以不同浓度的四逆软肝方和不同浓度扶正化瘀片干预24h,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,挑选四逆软肝方干预细胞的高、中、低浓度和阳性对照药扶正化瘀片的适宜浓度。2在四逆软肝方高、中、低药物浓度和阳性对照药适宜浓度下干预L02和LX-2细胞24h,在显微镜下观察细胞形态变化。3在四逆软肝方高、中、低浓度下干预L02和LX-2细胞24h,并以阳性对照药进行对照,检测细胞凋亡情况。4在四逆软肝方高、中、低药物浓度下干预L02和LX-2细胞,应用Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2的表达情况。结果:1随着浓度的增加,L02和LX-2存活率均出现下降,但LX-2细胞存活率下降更为明显。根据细胞存活率情况,选择四逆软肝方1、2、4 mg·ml~(-1)作为后期实验干预的高、中、低浓度,阳性对照药扶正化瘀片选择0.3mg·ml~(-1)作为干预浓度。2显微镜下,LX-2细胞随着给药浓度增加生长状态发生变化,出现脱落、抱团生长等现象;L02细胞无明显变化。3高、中、低浓度干预下,LX-2细胞凋亡明显,L02细胞凋亡不明显(P0.05)。4高、中、低浓度干预下,LX-2细胞Caspase-3蛋白表达量明显升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达量明显降低(P0.01)。L02细胞各组中Caspase-3和Bcl-2蛋白表达量无差别(P0.05)。结论:1四逆软肝方水提物对LX-2和L02细胞均有抑制作用,但是作用浓度相差较大。其共同出现的抑制作用可能是由药物的浓度增加改变了细胞渗透压导致。2四逆软肝方水提物在1、2、4mg·ml~(-1)浓度下,明显增加了LX-2细胞的凋亡率,对L02细胞凋亡无影响。说明该方在临床运用中起到逆转肝功能和逆转肝硬度程度作用和该方选择抑制肝星状细胞有关。3四逆软肝方水提物在1和4 mg·ml~(-1)可明显上调LX-2细胞Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达,对L02细胞的Caspase-3和Bcl-2表达无影响。说明四逆软肝方可能是通过影响LX-2细胞的Caspase-3和Bcl-2两种蛋白来促进该细胞凋亡。4四逆软肝方在在治疗肝纤维化过程中可保护肝细胞,调控肝星状细胞凋亡。使损伤的肝脏得到双向的修复。
【图文】：

水提物,细胞,变圆,片选

2 不同浓度四逆软肝方水提物作用 24h后，L02和 LX-2细胞在显微镜下状况：阳性对照组扶正化瘀片选择0.3mg·ml-1作为干预浓度，，四逆软肝方选择 1mg·ml-1、2mg·ml-1、4mg·ml-1作为观察浓度。药物干预 24小时后，显微镜下观察 L02细胞，除在 4mg·ml-1和扶正化瘀组中可以看到细胞出现少量脱离外、形态变圆外，其余组与正常组比较无明显变化；观察 LX-2细胞，随着四逆软肝方水提物浓度的增加，细胞出现抱团缩聚、数量明显减少的现象，扶正化瘀组也出现类似情况。（图 3）

药物作用,细胞形态,药物,双荧光

图 3 药物作用 24小时后 L02 细胞和 LX-2细胞形态情况：×403 药物对 LX-2和 L02 细胞凋亡的影响：选择AnnexinV-FITC/PIapoptosis试剂盒对药物干预 24小时后的细胞进行染色，利用 CellometerK2 双荧光细胞分析
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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