黄连生物碱的色谱分离与黄连组分的活性研究

发布时间：2020-06-06 22:54

【摘要】：黄连是一味传统中草药,现代药理研究表明,黄连是碱性药物的重要来源,在糖尿病、肿瘤等疾病的治疗方面具有较好的功效。黄连中的主要药效成分为生物碱,其在色谱分离及纯化制备中存在峰易拖尾及载样量低等问题,这些技术难点制约了黄连的物质基础研究及其在医药界的发展。为了解决这些问题,本论文以实验室自主研发的带电荷C18HCE色谱柱,建立了基于表面静电排斥/反相混合模式色谱的黄连生物碱分析方法。实现了黄连中主要生物碱在色谱分析上的对称峰形和分离选择性,结合质谱对分离出的6个主要色谱峰进行了归属,分别为黄连碱、药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀,并对湖北、重庆两地不同批次的黄连药材进行了生物碱的定量分析,结果显示不同产地不同批次的黄连中生物碱的含量差异较大。在优化了黄连生物碱的高效液相色谱分析方法的基础上,以高效制备液相色谱技术、并结合膜分离技术,建立了黄连总生物碱的纯化制备方法。在此方法下,黄连总生物碱的纯度从39.62%提高到88.87%,总生物碱的回收率可达94.5%,所得产品在颜色上有了很大的改善。对制备所得馏分进行了D2、Mu、M3、5-HT2A、GPR120、FFA1等受体的活性测试实验,结果显示,馏分Fr.1表现出特异的毒蕈胆碱受体(M3)激动活性,这一活性筛选结果在黄连活性研究方面未见报道。以此为基础,展开了以M3激动活性为导向的馏分Fr.1纯化制备工作,目前得到了两个还需继续纯化的二维馏分。本论文解决了黄连生物碱在液相色谱上的分析、分离纯化难点,可实现黄连生物碱在液相色谱上的优异峰形和选择性,可使黄连总生物碱的纯度从39.62%提高到88.87%。筛选得到了表现出毒蕈胆碱受体(M3)激动活性的组分。这些实验结果为黄连的研究提供了新颖的分离分析和纯化制备方法,对黄连的物质基础和药理活性研究具有重要的意义。同时,也可为其它碱性化合物的研究提供一定的参考。
【图文】：

表面化学结构,代表性

C18HCE 色谱柱对碱性化合物的分离最具优势，其代表性表见图 2-1。在低 pH 和低离子强度酸条件下，该色谱柱对碱性化合物特的优势。研究发现，C18HCE 色谱柱[79]对碱性化合物的分离属于表/反相混合模式色谱机理，分析对象的保留行为及选择性不仅受有机的影响，而且受流动相添加剂种类、浓度等多元化因素影响。随后，W也推出带有表面正电荷的 CSHC18 色谱柱，该色谱柱在低离子强度条件下，对碱性化合物的分离分析同样能起到很好的效果。章选用黄连生物碱为研究对象，使用表面正电荷反相 C18HCE 色谱柱流动相中添加剂的种类及其在流动相中的体积分数，实现黄连主要生色谱上的对称峰形及良好的选择性，并结合质谱及文献信息对其主要识别，最后，利用优化的色谱方法对湖北、重庆两个产地不同批次的主要生物碱类物质进行了定量分析。

对比图,色谱柱,对比图,流动相添加剂

图 2-2 Welch Ultimate XB-C18 和 C18HCE 两种色谱柱分析结果对比图Figure 2-2 Comparative analysis of Welch Ultimate XB-C18 and C18HCE column2.3.2 流动相添加剂的优化前面已经提到，C18HCE 色谱柱适合在低离子强度酸性条件下使用，并考虑到与质谱仪器的兼容性，我们选择色谱分析中常用的易挥发的甲酸、乙酸作为流动相添加剂，通过优化其在流动相中所占的体积分数，考察这两种酸性添加剂对黄连生物碱的色谱峰形、分离选择性及保留行为等的影响。实验过程中，分别以体积分数为 0.01%、0.05%、0.1%、0.5%的甲酸和乙酸为流动相添加剂对相同的黄连样品进行分析，实验结果见图 2-3。可以看出，在这两种酸作为添加剂的条件下，得到的色谱峰形都比较对称，该实验结果进一步表明表面正电荷色谱柱C18HCE 在酸性添加剂条件下能够实现黄连生物碱主要色谱峰的对称峰形。黄连生物碱的保留主要受流动相中离子强度的影响，随着流动相中酸性添加剂所占体
【学位授予单位】：湖北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.72;R284.1

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