梅花鹿角盘多肽和胶原肽的制备及抑制乳腺癌细胞增殖的初步研究

发布时间：2020-06-07 03:10

【摘要】：鹿角盘是马鹿或梅花鹿在鹿茸锯掉之后,余留在鹿角上剩余鹿茸的骨化物质,在每年春天新鹿茸长出之前自行脱落,形状似盘子,所以称为“鹿角盘”,是鹿角胶和鹿角霜的主要原料。鹿角盘是鹿茸的副产品,近些年来,人们对鹿角盘生物活性的研究越来越关注,但是鹿角盘蛋白质类资源尚未能完全体现其药用价值。蛋白质及多肽在生命活动中具有相当重要的作用,鹿角盘主要的药理功效成分为其中含有的接近40%的粗蛋白,但是,大量研究证实蛋白质在生物体内部分是以小分子多肽的形式被吸收。所以,本课题以从鹿角盘中提取具有生物活性的多肽及胶原肽为切入点,并且对其抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖活性进行初步研究,旨在提高鹿角盘的利用率,彰显鹿角盘的药用价值,对鹿角盘这一宝贵中药的进一步研究以及开发利用具有指导性的意义。主要研究内容和结果如下:本实验以鹿角盘粉末为原料,利用弱酸性缓冲盐溶液与超声波辅助技术相结合进行提取,Sephadex G-25分子筛层析除盐,Sephadex G-50分子筛层析后得到鹿角盘多肽;另一方面利用100℃热水浴4次提取、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶复合酶酶解等方法,最终得到鹿角盘胶原肽,利用二甲酸喹啉法、Tricine-SDS-PAGE电泳、质谱法等对多肽及胶原肽进行分析。在此基础上,以人乳腺癌细胞系MCF-7为体外研究对象,通过MTT法检测总肽、胶原蛋白、多肽和胶原肽对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的抑制情况。实验结果表明,超声功率越大,鹿角盘总肽浓度越高,再结合SDS-PAGE电泳结果,我们选取200w超声处理后总肽粗提物进行后续试验;鹿角盘多肽经Tricine-SDS-PAGE三层胶电泳检测其分子质量集中分布在6500Da以下;复合酶解法制备的胶原肽经电泳及质谱检测其分子质量集中分布在6500Da以下;MTT法检测鹿角盘蛋白多肽对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响,结果显示:与鹿角盘总肽和鹿角盘胶原蛋白对照组比较,鹿角盘多肽的抑制效果最好,其次为鹿角盘胶原肽,而鹿角盘总肽略好于鹿角盘胶原蛋白。其中鹿角盘多肽在浓度较低(20μg/mL)时,对人MCF-7细胞的抑制率高于胶原肽。
【图文】：

图 2-1 蛋白标准曲线Fig.2-1Protein standard curve表 2-4 样品溶液吸光度值Table 2-4 Sample solution luminosity values Tricine-SDS-PAGE 电泳检测，梅花鹿角盘总肽蛋白含量较为丰富，其中在 20.1kDa 以图可知，超声功率越大，14.3kDa 下两条带明显变弱，结选取 200w 超声处理后总肽粗体物进行后续试验。 1 2 3 4 5 功率 0 200 285 380 475 值 0.0694 0.0815 0.0885 0.225 0.265 度 0.8036 1.1658 1.3212 2.0214 2.0572

图 2-3 鹿角盘多肽的 SDS-PAGE 电泳图Fig.2-3 SDS-PAGE Electrophoresis of polypeptides鹿角盘胶原肽盘胶原蛋白的角盘胶原蛋白液颜色呈淡黄色，，嗅之微腥浓度的测定（BCA 法）定吸光值绘制的标准曲线如图 2-4 所示：标92 代入公式可计算所提胶原蛋白浓度为 11y = 0.0754x - 0.0076R2 = 0.99660.10.20.30.40.50.60.70.80.9
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2700747