黄芪皂苷下调PLK2抑制结直肠癌细胞迁移的研究

发布时间：2020-06-07 18:05

【摘要】：黄芪是中国传统的中草药,又是食药两用物品,所含黄芪皂苷具有抑制肿瘤生长、转移、血管生成与调节肿瘤免疫等功能。结直肠癌是消化道常见恶性肿瘤之一,其治疗除了常规的外科切除、放疗和化疗手段以外,分子靶向药也是一种有效的治疗方式。PLKs,Polo样激酶(polo-likekinases),是一种高保守丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。哺乳动物PLKs存在2个结构域,N末端蛋白激酶结构域和C末端polo-box结构域,polo-box结构域与底物结合和调节激酶活性有关。PLK2是细胞分裂的有效调节剂,参与细胞周期中心体的成熟、有丝分裂的进入与染色体的分离等过程。本文首先探讨黄芪皂苷对结直肠癌细胞的作用效果:经CCK8细胞活性实验、克隆形成实验,显示黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅱ对结直肠癌细胞的增殖无影响(p0.05);经transwell迁移实验、细胞划痕实验观察黄芪皂苷对4种结直肠癌细胞系迁移能力的影响,表明黄芪皂苷Ⅱ对结直肠癌细胞DLD1、HCT116、HT29的迁移能力均有抑制作用(p0.05),对HCT15细胞的迁移能力无影响(p0.05);异黄芪皂苷Ⅱ仅对HCT116细胞的迁移具有抑制作用(p0.01),对其他肠癌细胞的迁移能力无影响(p0.05)。分析表明,相同条件下黄芪皂苷干预各类肠癌细胞会出现不同反应,表明细胞间具有异质性。进一步就黄芪皂苷对结直肠癌细胞可能发挥的作用机制进行探讨:经Western Blot实验、qRT-PCR实验表明,黄芪皂苷能够下调表达PLK2,进一步在DLD1细胞系上构建敲降PLK2的慢病毒稳定细胞株DLDl-shPLK2,经细胞增殖实验和细胞迁移实验结果表明,沉默PLK2的表达对DLD1的增殖无影响(p0.05),而对细胞的迁移能力有影响(p0.05);验证实验结果与黄芪皂苷处理肠癌细胞的结果相一致。由此推测,黄芪皂苷通过下调PLK2的表达抑制了肠癌细胞的转移,从而为该物质治疗与应用提供了依据。
【图文】：

图１－２２０１２年全球男性（上）和女性（下）结直肠癌死亡率的分布图逡逑邋Ｇｌｏｂａｌ邋Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ邋Ｃａｎｃｅｒ邋Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ邋ｉｎ邋Ｍｅｎ邋（ａｂｏｖｅ）邋ａｎｄ邋Ｗｏｍｅｎ邋（ｂｅｌｏｗ癌发病率和死亡率的时间趋势逡逑的结直肠癌发病率整体呈上升趋势，但不同的国家增长速增长速率较缓，死亡率呈下降趋势，如美国、澳大利亚、

逦ｓｃａｔ邋ｔｗｍ）逡逑ｔｍｍ邋＆ｍｎ逡逑图２－１邋ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ克隆载体逡逑Ｆｉｇ．２－１邋ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ邋ｃｏｌｏｎ邋ｖｅｃｔｏｒ逡逑Ｍａｒｋｅｒ邋Ｓａｍｐｌｅ逡逑图２－２酶切ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ载体逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ邋ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ邋ｃｏｌｏｎ邋ｖｅｃｔｏｒ逡逑（３）胶回收：回收凝胶电泳酶切载体。用ＴＩＡＮＧＥＮ邋ＤＮＡ纯化试剂盒回收目的片段。逡逑胶回收步骤：①柱平衡：向吸附柱加入５００邋ｐＬ平衡液，１２０００邋ｒｐｎｉ离心１邋ｍｉｎ，，去离心管逡逑废液；②称量切下来的胶，加入等体积的ＰＣ溶液，５０°Ｃ水浴１０邋ｍｉｎ，在此期间温和的上逡逑下倒置样品，使胶充分溶解，将溶解后的胶溶液转移至吸附柱收集管中；③〗２０００邋ｒｐｍ离逡逑
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2701799