冬凌草甲素诱导胃癌SGC-7901细胞DNA损伤与自噬的研究

发布时间：2020-06-08 04:05

【摘要】：目的:研究冬凌草甲素对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用以及诱导DNA损伤的影响,探求冬凌草甲素是否能够诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬。方法:(1)MTT法及结晶紫法检测冬凌草甲素对胃癌SGC-7901细胞的增殖活性的影响。(2)流式细胞术检测冬凌草甲素对胃癌SGC-7901细胞周期的影响。(3)吖啶橙法检测自噬酸性囊泡。(4)Western blot检测DNA损伤相关蛋白γH2AX(S139)、phospho-ATM(S1981)、phospho-P53(S15)、phospho-CHK2(T68)、phospho-cdc2(Y15)、phospho-cdc25c(S216)以及自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1表达量的变化。(5)细胞免疫荧光实验检测冬凌草甲素对胃癌SGC-7901细胞DNA损伤相关蛋白phospho-ATM(S1981)和γ-H2AX(S139)焦点形成的影响。结果:(1)MTT结果显示不同浓度冬凌草甲素对胃癌SGC-7901细胞均有不同程度的抑制作用,其抑制作用具有浓度依赖关系.(2)结晶紫染色结果显示随药物浓度增高,细胞密度逐渐减小,显示OD值逐渐减小。(3)流式细胞术结果显示随着药物浓度的升高,G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,在40μM达到阻滞最高峰,表现为G2/M期阻滞。(4)吖啶橙检测自噬结果显示酸性自噬囊泡的数量呈浓度依赖性增高。(5)Western blot结果显示DNA损伤相关蛋白γH2AX(S139)、phospho-ATM(S1981)、phospho-P53(S15)、phospho-CHK2(T68)、phospho-cdc2(Y15)、phospho-cdc25c(S216)蛋白水平呈浓度依赖性增高,自噬相关蛋白LC3-Ⅰ蛋白水平呈剂量依赖性减少、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平呈浓度依赖性增多、LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比例减小;(6)免疫荧光结果发现phospho-ATM(S1981)、γH2AX(S139)焦点共定位,而且随着药物浓度增大而增多。结论:(1)冬凌草甲素可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,通过“ATM-CHK2-Cdc2”通路诱导G2/M期阻滞,并且诱导DNA损伤,但DNA损伤信号通路具体机制有待进一步探索。(2)此外,冬凌草甲素能够诱导胃癌SGC-7901细胞自噬,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1水平随药物浓度增高而增加。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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本文编号：2702516