化痰活血解毒方对兔腹主动脉药物涂层支架置入后新生动脉粥样硬化斑块的影响

发布时间：2020-06-08 05:11

【摘要】：目的:建立兔腹主动脉粥样硬化DES置入模型,研究化痰活血解毒方对兔腹主动脉DES置入后新生动脉粥样硬化斑块的影响。方法:1、建立兔腹主动脉粥样硬化DES置入模型及实验分组:选取雄性日本大耳白兔(清洁级)40只预适应饲养1W后进行腹主动脉球囊损伤,高脂饲料(基础饲料中加入胆固醇5%,猪油5%,蛋黄粉3%)喂养8W,于腹主动脉最狭窄处置入DES支架,随机分为4组:模型组(MG组),瑞舒伐他汀组(RG组),化痰活血解毒方低剂量组(LG组),化痰活血解毒方高剂量组(HG组)。其中化痰活血解毒方药物组成为:瓜蒌皮15g,薤白18g,皂角刺15g,血竭2g,红曲25g,三七5g,忍冬藤25g,以上七味中药,其中红曲、血竭、三七碎成细粉状;瓜蒌、皂角刺、忍冬藤、薤白加水反复煎三次,后浓缩为浸膏,然后加入上述细粉,真空干燥,粉碎,即得中药,经灌胃途径给药。各组给予相应药物干预24周。2、利用ELISA法检测不同药物干预24周后各组血清CRP、IL-6、MMP-9的表达水平。3、运用OCT扫描成像技术观察支架置入后支架段血管内膜的情况:药物干预24周后评价各组支架处血管管腔面积、新生内膜厚度、新生内膜面积等指标。4、通过免疫组织化学法检测各组血管的平滑肌肌动蛋白(a-Actin)、平滑肌骨桥蛋白(OPN)、巨噬细胞CD68的表达。结果:1、动物模型:高脂饲料喂养后实验兔体重均有所增加,后期体重基本不变。腹主动脉球囊损伤后兔子共死亡4只,死亡原因考虑为应激性损伤等。DES支架置入前行腹主动脉造影显示血管狭窄程度约为30~80%。手术后3天内小部分实验兔出现精神淡漠,食欲不振的情况,3天后基本好转;余实验兔术后恢复良好,正常饮食。模型组兔子在DES置入术后立即死亡1只,猜测其死亡原因可能为血管应激性痉挛等;化痰活血解毒方低剂量组兔子死亡2只,一只DES置入后即刻死亡,另一只于术后3天内死亡,化痰活血解毒方组死亡一只,其死亡原因为术后手术伤口持续出血,考虑因缝合包扎手术创口时缝合线未结扎紧密有关。余各组实验兔状态良好,直至实验结束。兔腹主动脉血管造影提示血管畅通,血流正常,支架贴壁良好。药物干预过程中各实验兔精神状态良好,毛发正常有光泽,进食、二便等未见明显异常,未见明显药物不良反应。2、血清炎症因子:与MG组相比,RG组、LG组与HG组CRP、IL-6的表达水平均低于MG组(P0.05);与RG组相比,LG组血清中CRP、IL-6的表达明显低于RG组(P0.05),HG组的表达无明显统计学意义(P0.05);与LG组相比,HG组表达水平明显较高(P0.05)。血清中MMP9的表达水平结果显示:与MG组相比,RG组、LG组与HG组表达水平明显低于MG组(P0.05);与RG组相比,LG组的表达明显低于RG组(P0.05),HG组的表达稍高于RG组,但无明显统计学意义(P0.05);与LG组相比,HG组的表达高于LG组(P0.05)。3、OCT扫描:经定量分析后结果显示:与MG组相比,RG组、LG组、HG组的管腔面积均比MG组均大,LG组的管腔面积明显较大(P0.05),RG组、HG组与MG组之间差异无明显的统计学差异(P0.05);与RG组相比,LG组、HG组管腔面积无明显差异(P0.05);与LG组相比,HG组无明显统计学意义(P0.05)。与MG组相比,RG组、LG组、HG组的新生内膜面积及新生内膜厚度均低于MG组,其中LG组的新生内膜面积显著降低(P0.05);与LG组相比,RG组、HG组的新生内膜面积无明显统计学意义(P0.05)。4、免疫组化染色:各组兔腹主动脉支架段血管a-Actin免疫组化定量分析后结果显示:与MG组相比,RG组a-Actin的阳性表达稍高于RG组,但无统计学意义(P0.05);LG组a-Actin的阳性表达明显高于RG组(P0.05),HG组a-Actin的阳性表达与RG组无明显统计学意义(P0.05);LG组a-Actin的阳性表达稍高于RG组,HG组a-Actin的阳性表达稍低于RG组,但两者与与RG组相比均无统计学意义;HG组与LG组相比有统计学意义(P0.05)。各组兔腹主动脉支架段血管OPN、CD68免疫组化定量分析后结果显示:RG组、LG组、HG组OPN、CD68的阳性表达均显著低于MG组,有明显的统计学意义(P0.05);LG组、HG组OPN、CD68的阳性表达与RG组相比无明显统计学意义(P0.05);RG组与HG组相比OPN、CD68的阳性表达无明显统计学意义(P0.05)。结论:1、化痰活血解毒方可降低DES置入后血清炎症因子CRP、IL-6、MMP9的表达水平,具有抑制炎症反应的作用,可抑制支架内新生动脉粥样硬化的形成。2、化痰活血解毒方可抑制VSMC的表型转化,抑制内膜增殖及迁移;抑制巨噬细胞CD68的过表达,具有抗支架内新生动脉粥样硬化斑块的作用。
【图文】：

图 1 实验技术路线图2.2 兔腹主动脉药物涂层支架置入模型的制备2.2.1兔腹主动脉粥样硬化模型首先选取健康雄性日本大耳白兔（清洁级）40 只，在本院动物房饲养并进行模型制备，每只兔子术前做好标记。饲养环境:温度 23 ℃ ～ 25 ℃，光照周期为12 h:12h，相对湿度为 50% ～ 60%，检疫观察预适应喂养 1 周。腹主动脉球囊损伤术：术前 3 天各组给予实验兔阿司匹林 25mg/d 灌胃，术前 24h 禁食。配制 10%水合氯醛 3-5ml/kg/只进行腹腔注射麻醉。麻醉成功标志：四肢瘫软、呼吸快慢均匀、角膜反射迟钝。将实验兔绑置于兔台上，用电推剪剪去右股动脉周围体毛，剃毛直径约 5cm，碘伏纱布自手术中心向四周消毒 3 次并铺巾，1%利多卡因针皮下局部麻醉。手术切开右股动脉搏动处下发的皮肤，用直钳及弯钳纵行逐层钝性分离右股动脉，完全暴露手术处股动脉约 2cm 长度，手术用 4#线切 2 段约 3cm,一段于股动脉远心端打结，另一段由助手辅助提拉股动脉近心端线并将手术刀柄置于股动脉下固定。直视下以 21G 桡动脉穿刺针行股动脉穿

结果1 模型的建立DES 置入术后 5 天内小部分实验兔出现精神淡漠，食欲不振，后基本好转；余实验兔术后恢复良好，饮食正常。高脂饲料喂养后实验兔体重均增加，后期体重增长缓慢。球囊损伤术后兔腹主动脉血管造影提示血管明显狭窄（30%-80%）（见图 2），8W 后于明显狭窄处 DES 置入，在造影的透视下定位并释放支架，造影显示支架贴壁良好。至实验结束，，MG 组、RG 组及 LG 组兔成功造模各 8 只，HG 组兔成功造模 7 只。药物干预后各实验兔精神状态良好，毛发正常有光泽，进食、二便等未见明显异常，未见明显药物不良反应。
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2702591