侧柏叶的化学成分及药理活性研究

发布时间：2020-06-08 16:28

【摘要】：侧柏叶(Platycladi Cacumen)是一味具有多种药用价值的传统中药,资源丰富,多部古代医学著作记载其传统功效。为进一步明确侧柏叶脂溶性成分的生发活性物质基础,本文在查阅大量文献基础上,对侧柏叶石油醚提取物中脂溶性成分进行详细的提取分离,对其挥发性成分进行分析,并对其生发药理活性进行了研究;还对侧柏叶粗多糖超声提取工艺进行了优化,研究了侧柏叶粗多糖体内抗肿瘤活性,为侧柏叶的深入开发和临床应用提供科学依据。具体研究内容如下:文献表明,侧柏叶中主要含有黄酮类、挥发油、鞣质等化学成分,关于黄酮类及挥发油成分提取、分离和含量测定的研究报道较多,但中药侧柏叶的化学成分研究仍然不充分。文献报道侧柏叶具有促进毛发生长、止血、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等药理作用,但其潜在药理作用也未得到深入研究开发。故侧柏叶其他化学成分和药理活性的探究具有极其广阔的开发前景。化学成分方面,本论文采用正相硅胶柱色谱方法与凝胶Sephadex LH-20柱色谱方法相结合对侧柏叶石油醚提取物中脂溶性小分子成分进行提取、分离和纯化,鉴定出两个化合物异海松烯醇(化合物1)和红松内酯(化合物2)。其中异海松烯醇为首次从侧柏叶中分离得到。并对侧柏叶石油醚提取物进行GC-MS分析,共鉴定出烯烃、醇、酮、醛、酯五类42种化合物,含量最多的是蒎烯。经分析比对,分离鉴定出的两种单体化合物,均未在GC-MS检测的结果中,两种化合物均具有极性小,脂溶性高且不易挥发的特点。同时将侧柏叶去除脂溶性成分后的药渣进行充分提取,得到侧柏叶大分子化合物粗多糖。根据单因素试验的结果,选取超声提取的温度、超声提取的时间和液料比三种显著影响提取率的因素,采用响应面法对侧柏叶粗多糖提取工艺进行优化。试验获得的最佳提取条件是:提取温度72℃,提取时间为67 min,液料比为19:1,侧柏叶粗多糖的含量为6.87±0.18%。药理活性方面,(1)侧柏叶粗多糖的抗肿瘤活性研究:通过建立H_(22)小鼠皮下移植瘤模型,计算抑瘤率、脾脏指数及胸腺指数,检测血清中细胞因子水平和反应机体的抗氧化能力,再进一步根据组织切片HE染色法及Hoechst33258染色法,对侧柏叶粗多糖的抗肿瘤活性及机理进行初步探讨。结果表明,侧柏叶粗多糖低剂量组具有34.83%的抑瘤率,中剂量组42.70%的抑瘤率,高剂量组49.44%的抑瘤率。并且,侧柏叶粗多糖具有保护机体免疫器官的功能,能够调节H_(22)荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ的表达水平,侧柏叶粗多糖还能够降低血清中抗氧化活性指标MDA含量并显著提高CAT和SOD的活力,具有抗氧化作用,最终发挥抗肿瘤的活性。(2)侧柏叶生发活性成分的研究:本论文对侧柏叶石油醚提取物促进毛发生长的药理作用进行研究,初步探讨了所分离得到的异海松烯醇和红松内酯促进毛发生长活性及其机理。采用松香-石蜡脱毛法建立脱发模型,检测小鼠新生毛发的长度和重量及细胞因子VEGF以及TNF-α的水平,并显微观察新生毛发的毛囊形态改变。结果表明,红松内酯组对新生毛发长度增长的效果明显(P0.01);异海松烯醇和红松内酯给药组均显著增加新生毛发的重量(P0.01)。侧柏叶两种脂溶性单体化合物和米诺地尔均显著提高血清中VEGF水平(P0.01)且红松内酯给药组血清中TNF-α的水平显著升高(P0.05或0.01)。组织切片观察结果说明,异海松烯醇和红松内酯可以提高毛囊的活力,保持毛囊正常的生长状态,具有促进毛发生长的作用,其机制可能与血清中的VEGF含量等有关。结论,本文研究表明侧柏叶粗多糖具有抗肿瘤活性,主要通过提高机体免疫功能和抗氧化能力来实现对肿瘤的抑制作用;侧柏叶脂溶性化合物异海松烯醇和红松内酯具有显著地促进毛发生长的作用,明确了中药侧柏叶的生发活性物质基础。
【图文】：

气相色谱,侧柏叶,提取流程

9图1.1 侧柏叶脂溶性化合物提取流程图Fig.1.1 Extraction process of the liposolubility compounds from the Platycladi Cacumen1.3.2 侧柏叶石油醚提取物的 GC-MS 分析色谱条件1.3.2.1 气相色谱（GC）条件DB 25 弹性石英毛细管柱(30 m×250 μm×0.25 μm)；进样口温度 260℃，升温程序：初始柱温 50℃，保持 3 min，再以 10℃/min 升温至 280℃，280℃保持 10 min，载气为高纯He，，柱流量 1.0 mL/min，分流比 20:1；进样量 2 μL。1.3.2.2 质谱（MS）条件EI 离子源

侧柏叶,总离子流,柏叶

134.6 (C-13), 143.8 (C-14), 147.3 (C-8), 174.2 (C-16), 177.5 (C-19)。以上数据与文献[556]报道一致，故鉴定化合物 2 为红松内酯（pinusolide）。1.4.3 侧柏叶石油醚提取物 GC-MS 分析结果对侧柏叶石油醚提取物进行 GC-MS 分析，得到总离子流程图（图 1.2），采用数据自动检索功能与标准物质的质谱比对，根据质谱的裂解偶合数据确定化学结构，应用峰积归一化法，计算不同组分百分含量。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284;R285

【参考文献】