基于自噬探讨明目地黄丸改善萎缩性年龄相关性黄斑变性的机制研究

发布时间：2020-06-09 01:18

【摘要】：目的:以BN大鼠为研究对象,采用PBS新鲜配置1%的碘酸钠尾静脉注射的方法,模拟干性AMD动物造模,并在造模后多个时间点观察RPE细胞氧化损伤动物模型的细胞自噬状态。观察中药组方明目地黄丸干预后,是否对动物模型RPE细胞的细胞自噬和凋亡有干预作用,评估其对于实验模型RPE细胞通过mTOR通路调节自噬从而进行损伤保护的作用机制。方法:将90只BN大鼠随机分为中药组、模型组和空白组各30只。适应性喂养1周后,中药组和模型组予1%碘酸钠(40mg/kg)尾静脉注射造模。中药组在实验开始后的第1天开始灌胃给药,采用明目地黄丸方汤剂灌胃,每日灌胃1次,根据体重给药,灌胃剂量12g/kg,直至实验结束。空白组和模型组实验开始后第1天开始予生理盐水灌胃,每日灌胃1次,根据体重给药,灌胃剂量12g/kg,直至实验结束。并于造模后1天、7天、14天时水合氯醛过量麻醉处死大鼠(每个时间段每组随机处死10只),完整摘取眼球,剥离视网膜组织标本。通过HE染色观察视网膜及光感受器组织结构改变;通过Western-Blot法检测各组RPE细胞的p-mTOR、LC3-II及Caspase-3的蛋白表达。结果:碘酸钠尾静脉注射可以成功制造氧化损伤的大鼠视网膜模型,通过HE染色观察视网膜结构改变、色素上皮层下沉积物及内外核层细胞损伤状态,证明该大鼠网膜的干性AMD动物模型造模成功。与正常空白组相比,模型组的视网膜色素上皮损伤并增厚,外核层结构损伤,排列紊乱,且随着时间的推移内外核层呈波浪状改变;与模型组相比,中药组的视网膜色素上皮及内外核层结构逐渐有所恢复。1天模型组与1天空白对照组比,p-mTOR蛋白表达水平下调(P0,05),LC3II蛋白表达水平上调(P0.05),Caspase-3蛋白表达水平增加(P0.05);7天、14天模型组和空白组对照组相比,p-mTOR蛋白表达水平升高(P0.05),而LC3II蛋白表达水平下调(P0.05),Caspase-3蛋白表达水平升高(P0.05);与1天模型组相比,中药组p-mTOR、LC3-II、Caspase-3蛋白表达水平变化不明显,差异均不具有统计学意义(P0.05);与7天、14天模型组相比,中药组p-mTOR蛋白表达水平下降(P0.05),Caspase-3蛋白表达明显下降(P0.05)。结论:通过观察视网膜组织结构改变,色素上皮层下脂质沉积物以及内外核层细胞损伤程度,表明碘酸钠尾静脉注射能够使得大鼠视网膜色素上皮发生氧化损伤改变,干性AMD模型造模成功。急性氧化损伤(1天)会使得mTOR通路活性应激性下降,细胞自噬活性应激性增加,细胞凋亡损伤加重,但是慢性氧化损伤(7天、14天)时mTOR通路的活性逐渐上升,而细胞自噬活性逐渐下降,细胞凋亡在一定程度上受到了抑制,这可能是在无药物干预状态下,细胞维持自我环境稳态的一种调控机制。明目地黄丸对氧化损伤模型的急性损伤初期,药物疗效有限,对于RPE细胞自噬及凋亡干预效果不明显。当服用明目地黄丸到一定疗程(7天、14天)后,其对RPE细胞自噬具有促进作用,且能使细胞自噬在一定时间内维持在相对高水平,并对细胞凋亡具有抑制作用。同时明目地黄丸可以通过抑制mTOR通路的活性,使RPE细胞自噬活性增强,减轻RPE细胞的氧化损伤,从而维持细胞内稳态。
【图文】：

３．１动物分组及造模逡逑将９０只ＢＮ大鼠随机分为三组，分别为空白组３０只，模型组３０只，实验组３０只，逡逑具体分组造模情况如下：逡逑中药组：予１％碘酸钠（４０ｍｇ／ｋｇ）尾静脉注射造模，在实验开始后的第１天开始灌逡逑胃给药，每日灌胃１次，根据体重给药（每３天称１次体重），灌胃剂量１２ｇ／ｋｇ，直至逡逑实验结束；逡逑模型组：予１％碘酸钠（４０ｍｇ／ｋｇ）尾静脉注射造模，实验开始后第１天^u始予生理逡逑盐水灌胃，每日灌胃１次，根据体重给药（每３天称１次体重），灌胃剂量１２ｇ／ｋｇ，直逡逑至实验结束；逡逑空白组：不予造模，实验开始后第１天开始予生理盐水灌胃，每日灌胃１次，根据逡逑体重给药（每３天称１次体重），，灌胃剂量１２ｇ／ｋｇ，直至实验结束。逡逑３．２研究路线逡逑

图３＿１逦图３－２逡逑１８逡逑
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2703953