雷公藤甲素细胞代谢组学方法与肝细胞毒性作用研究

发布时间：2020-06-10 02:17

【摘要】：目的:建立基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用(UHPLC-Q/TOF-MS)技术的拟靶标细胞代谢组学方法,并将建立的方法用于雷公藤甲素诱导HepG2和L02的细胞毒性作用研究。方法:以雷公藤甲素诱导HepG2细胞为研究载体,建立拟靶标代谢组学方法:采用Luna Omega 1.6μPolar C_(18)(100×2.1mm)色谱柱,ESI源正、负离子模式检测,首先对样本进行非靶标全扫描分析,再针对发现的差异代谢物进行目标性拟靶标代谢组学。采用建立的方法,分别对雷公藤甲素诱导不同时间的HepG2细胞和L02细胞进行代谢组学分析,通过PCA、OPLS-DA等方法筛选差异代谢物,结合HMDB、METLIN等在线数据库鉴定差异代谢物,采用MetaboAnalyst 4.0和KEGG对差异代谢物进行通路分析,根据K-Means聚类分析结合支持向量机分类方法和Pearson相关分析筛选雷公藤甲素对两种细胞的毒性作用生物标志物。结果:与常规分析方法相比,对于雷公藤甲素诱导HepG2细胞前后鉴定的差异代谢物种类,拟靶标代谢组学方法增加7个,新发现16个,校正2个;对于作用通路研究,拟靶标代谢组学方法新发现丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路,且三羧酸循环和鞘脂代谢的通路贡献率提高。雷公藤甲素诱导HepG2细胞不同时间代谢组学研究共鉴定出140个差异代谢物,筛选出5个潜在生物标志物,主要涉及氨基糖和核苷酸糖代谢、淀粉和蔗糖代谢,甘油磷脂代谢,嘌呤代谢和精氨酸、鸟氨酸代谢等。雷公藤甲素诱导L02细胞不同时间代谢组学研究共鉴定出82个差异代谢物,筛选出10个潜在生物标志物,主要涉及嘌呤代谢,谷胱甘肽代谢,甘油磷脂代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等。两种细胞代谢组学研究结果具有显著差异,相同差异代谢物17个,不同差异代谢物205个,脂质为显著差异成分,谷胱甘肽为共有潜在生物标志物,涉及不同代谢通路7条,相同代谢通路2条。结论:本研究成功建立了UHPLC-Q/TOF-MS拟靶标代谢组学方法,该方法可丰富差异代谢物鉴定的种类,提高鉴定准确度,有利于作用通路研究。雷公藤甲素诱导HepG2细胞和L02细胞均与嘌呤代谢和甘油磷脂代谢有关,但涉及的代谢通路差异显著,说明雷公藤甲素对HepG2细胞和L02细胞毒性作用存在差别,提示药物肝毒性研究细胞选择的重要性。
【图文】：

拟靶标代谢组学方法的数据采集和处理流程图

CCK-8测定不同浓度的雷公藤甲素对HepG2细胞的抑制率影响
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 赵孝淳;包映晖;;铁死亡与神经系统疾病[J];中华神经医学杂志;2017年01期

2 刘锷;韩林涛;薛大权;黄芳;李晶晶;;基于核磁共振代谢组学法检测灌服桂枝煎剂大鼠的血清代谢物[J];中国实验方剂学杂志;2015年18期

3 牛倩芸;刘月涛;李震宇;秦雪梅;;基于核磁代谢组学技术的阿霉素肝毒性研究[J];药学学报;2015年06期

4 邵凤;刘林生;阿基业;;GC/TOF-MS代谢组学技术研究雷公藤甲素在大鼠体内的急性毒性[J];中国药科大学学报;2014年06期

5 李桂兰;抗晶晶;殷志敏;;L-茶氨酸对H_2O_2致L02细胞损伤的保护作用及其机制研究[J];中国细胞生物学学报;2014年06期

6 姜泽群;姚志华;邓正亭;蒋鑫超;颜晓静;陈卫平;;凉血化瘀方拮抗内质网应激引起的L02肝细胞凋亡作用及机制研究[J];中国中药杂志;2013年20期

7 关鹏;石振华;李亚青;王娜;;铁死亡:一种新的细胞死亡方式[J];生物化学与生物物理进展;2013年02期

8 张春勇;余斌;陈克嶙;袁雪波;郭荣富;;L-精氨酸对脂多糖诱导免疫应激大鼠血清生化指标和肝脏的影响[J];营养学报;2011年04期

9 王鹤滨;;无处不在无处不需的“泛酸”[J];科学养生;2010年06期

10 骆永伟;施畅;廖明阳;;雷公藤甲素抗肿瘤作用机制研究进展[J];中国中药杂志;2009年16期

，

本文编号：2705625