从HPG轴角度探讨六味地黄汤及其“补泻”药对的补肾作用机制和药效成分

发布时间：2020-06-11 01:40

【摘要】：目的从神经内分泌系统中下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的角度探讨六味地黄汤及其三个“一补一泻”药对滋补肾阴的作用及其机制,并比较六味地黄汤及其补肾作用有效的“一补一泻”药对中所含主要成分的含量,从而明确该方的补肾作用及其机制、药效物质基础和组方原理。方法将60只小鼠随机分为空白对照组、肾阴虚模型组、六味地黄汤组、山茱萸-牡丹皮组、熟地黄-泽泻组、山药-茯苓组共6个实验组;连续9 d分别灌胃给予以上对应药物;第6-9 d,除空白对照组灌胃蒸馏水外,其他各组采用糖皮质激素法按50 mg/kg体重每天灌胃氢化可的松建立肾阴虚模型,观察各组小鼠的一般体征,并测定其体重变化;给药9 d后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血浆环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)的含量;采用放射免疫分析法测定小鼠HPG轴中血清促卵泡素(FSH)、雌二醇(E2)及睾酮(T)的含量,计算各组小鼠子宫及睾丸指数,并采用HE染色法观察子宫及睾丸的病理组织形态学改变。采用高效液相色谱法测定六味地黄汤及其补肾作用有效“一补一泻”药对(山茱萸-牡丹皮)所含獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷的含量,色谱条件为Hypersile C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(24:76),检测波长236 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温30℃。结果1、与空白对照组比较,肾阴虚模型组小鼠体重下降(P0.01),血浆c AMP含量升高,血浆c GMP含量降低,HPG轴中血清FSH、E2、T含量降低(P0.01)。2、与肾阴虚模型组比较,六味地黄汤组可升高肾阴虚模型小鼠体重,降低血浆c AMP含量,升高血浆c GMP含量,上调HPG轴中血清FSH、E2、T水平(P0.05或0.01),并使子宫及睾丸指数升高(P0.05),可修复受损的子宫及睾丸组织。3、与肾阴虚模型组比较,山茱萸-牡丹皮组能降低肾阴虚模型小鼠血浆c AMP含量,上调HPG轴中血清FSH、E2、T水平(P0.05或P0.01),并可修复受损的子宫及睾丸组织。4、山茱萸-牡丹皮药对中含有獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷,其浓度分别在0.10μg~1.65μg(r=0.9995),0.12μg~1.92μg(r=0.9991),0.23μg~3.36μg(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均回收率分别为102.29%,100.99%,102.48%,RSD值分别为1.48%,1.32%,0.75%,按生药量计其含量分别为0.050%,0.097%,0.364%,六味地黄汤中所含上述各成分的含量分别为0.081%,0.104%和0.363%。结论1、50 mg/kg氢化可的松注射液连续灌胃4d后,可建立良好的肾阴虚小鼠模型,其中血浆c AMP以及血清FSH、E2、T含量均可作为评价糖皮质激素法建立肾阴虚模型的重要指标。2、六味地黄汤改善肾阴虚的作用机制可能与其降低血浆c AMP含量,升高血浆c GMP含量,上调HPG轴中FSH、E2、T的含量,升高子宫及睾丸指数,修复受损子宫及睾丸组织有关。该方中的山茱萸-牡丹皮药对及其中所含的獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷可能是六味地黄汤改善肾阴虚的主要有效药对和药效成分。
【图文】：

小鼠,拱背,无光泽,毛发

阴虚模型小鼠一般体征的影响对照组小鼠活动灵敏、毛发有光泽、大便质硬且呈黄褐色；肾阴虚模型 1靡、略有拱背、毛发无光泽；肾阴虚模型 2 组小鼠萎靡不振、拱背、扎堆干枯无光泽、竖毛、大便干结；肾阴虚模型 3 组小鼠整体状态不佳，，有精、毛发脱落严重等现象，并有小鼠死亡。阴虚模型小鼠体重的影响白对照组比较，肾阴虚模型 1、2、3 组小鼠体重均有显著性差异（P< 0.提示：肾阴虚模型小鼠灌胃不同剂量氢化可的松后体重均有下降。结果见

小鼠,氢化可的松,造模方法,易激惹

图 2 对肾阴虚模型小鼠血浆 cAMP、cGMP 的影响（x±s）注：与空白对照组比较，**P＜0.01。源性糖皮质激素早期可使机体表现出烦躁多动、易激惹等腺皮质激素可抑制促肾上腺皮质激素的释放，从而减少类固现一系列“耗竭”的现象[28]。目前肾阴虚的造模方法大多采干预，但前期研究发现，小鼠经皮下或肌肉注射氢化可的松率太高，所以改用灌胃给药以减小刺激性，该方法操作简单虚模型。本实验结果表明，采用不同剂量的氢化可的松灌胃征较空白对照组变化不明显，肾阴虚模型 2、3 组小鼠出现发抖、拱背、扎堆、毛发干枯无光泽、竖毛、大便干结等现阴虚模型体征相符[29]。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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