雪上一枝蒿与金不换配伍作用研究

发布时间：2020-06-11 15:32

【摘要】：目的:以雪上一枝蒿和金不换这一药对为研究对象,研究雪上一枝蒿(ABD)与金不换(VBF)合煎以及雪上一枝蒿氯仿部位(CFA)和金不换水提物(WVBF)合并配伍这两种提取工艺后的化学成分变化,以期从化学成分角度阐明雪上一枝蒿-金不换药对配伍的科学内涵,以及两种配伍的区别,并通过动物实验探讨两者配伍的毒性变化和镇痛抗炎功效,比较配伍前后的毒性和药效变化,探究最佳配比。方法:(1)采用高效液相(HPLC)及核磁技术(NRM),对比雪上一枝蒿和金不换合并和合煎配伍前后的色谱峰图,并对化学成分的变化进行分析,探究变化原因。(2)建立斑马鱼心血管功能评价模型,分别随机选择10尾斑马鱼在显微镜下统计心率和观察有无心血管毒性表型,确定最佳浓度,再在该浓度下设置4组不同配比进行平行实验,评价CFA和WVBF不同配伍的心血管毒性。(3)上下法和改良寇氏法测雪上一枝蒿和金不换不同比例配伍的半数致死量(LD_(50)),比较合煎和合并配伍后的毒性变化;(4)以热板法和冰醋酸致小鼠扭体法为致痛模型,比较CFA,以及CFA和WVBF按1:2和1:5比例配伍组对小鼠中枢和外周的镇痛作用。以小鼠耳肿胀法评价雪上一枝蒿和金不换不同比例(1:1,1:2,1:5)合煎配伍的抗炎作用,用甩尾法实验比较两药配伍前后对小鼠甩尾潜伏期的影响。结果:(1)经HPLC图谱发现CFA和WVBF合并配伍后的化学成分与单独的CFA和WVBF相比没有明显变化,未发生化学层次的变化,而雪上一枝蒿、金不换单煎液与合煎液相比化学成分却存在明显差异,雪上一枝蒿-金不换配伍HPLC色谱出现4个明显的新峰,经核磁鉴定出了结构,为金不换中的口山酮类成分;(2)在心血管毒性评价实验中,单药CFA除了200 mg·L~(-1)浓度组外,其他浓度组对斑马鱼心率都没有影响,不诱发斑马鱼心律不齐,66.6和200 mg·L~(-1)浓度可诱发斑马鱼毒性表型。在不同配伍组心血管毒性评价实验中,除了1:5配伍组,别的实验组都诱发明显的心血管毒性表型。(3)小鼠急性毒性实验中,CFA与WVBF四个不同比例(5:1,2:1,1:2,1:5)合并配伍的LD_(50)依次增加,均高于CFA用上下法测定的LD_(50),而改良寇氏法测得的5个合煎配伍组(5:1,2:1,1:1,1:2,1:5)LD_(50)均介于两个单煎液之间,说明配伍降低了雪上一枝蒿的急性毒性,并且金不换的比例越高解毒效果越好。(4)热板试验结果表明,CFA和WVBF按1:2和1:5配伍组均可延长小鼠的舔足痛阈时间,其中按1:2比例混合给药组(20 mg·kg~(-1))的镇痛百分率比单独给予CFA(20mg·kg~(-1))和阳性对照阿司匹林组(200 mg·kg~(-1))的镇痛百分率要高,而在给药90 min后1:2配伍组的镇痛百分率与CFA组接近,均高于阳性对照组,说明1:2比例组有减毒存效的作用。1:5配伍组的镇痛百分率在给药30,60,90 min后逐渐增加,且显著高于CFA组,说明1:5比例组有减毒增效和延效作用。(5)扭体试验结果显示,各比例配伍组均能有效抑制冰醋酸诱导的小鼠扭体反应,其中1:2配伍组(20 mg·kg~(-1))的扭体抑制率低于单独给予CFA组(20 mg·kg~(-1));1:5混合给药组(20 mg·kg~(-1))的扭体抑制率略高于CFA组(20 mg·kg~(-1))。表明在外周镇痛方面,1:2配伍组有减毒减效作用,1:5配伍组有较弱的减毒增效功效。(6)小鼠耳肿胀试验表明,各配伍给药组均能有效减轻二甲苯所致小鼠的耳炎症,其中1:1(500 mg·kg~(-1))和1:2(875 mg·kg~(-1))合煎给药组的肿胀抑制率低于单独给予雪上一枝蒿单煎液组和吲哚美辛阳性对照组。1:5(1750 mg·kg~(-1))合煎给药组的小鼠耳肿胀抑制率与阿司匹林组(20 mg·kg~(-1))接近,略低于单煎液组(125 mg·kg~(-1))。表明抗炎方面1:1和1:2配伍组有减毒减效作用,1:5配伍组存在减毒存效功效。(7)小鼠热水缩尾试验表明,雪上一枝蒿单煎液(125 mg·kg~(-1)),以及和金不换按各个比例配伍组与空白对照组相比,均可提高小鼠的甩尾痛阈值,其中雪上一枝蒿单煎液的镇痛百分率最高,大于各配伍组和阳性对照组(20mg·kg~(-1))的镇痛百分率,其中按1:1(500 mg·kg~(-1))和1:2比例配伍合煎组(875mg·kg~(-1))的镇痛百分率相近,都小于吲哚美辛阳性对照组(20 mg·kg~(-1))的镇痛效果。1:5比例合煎组(1750 mg·kg~(-1))的镇痛效果比阳性对照组稍好,而各个组在90 min后的镇痛百分率与30 min相比是降低的,说明各个组的镇痛效果是随着时间逐渐下降的,并且与单煎液相比,各比例合煎组有减毒减效作用。结论:雪上一枝蒿与金不换合煎配伍HPLC色谱峰发生明显的变化,可促进金不换中口山酮类成分的溶出。无论合并还是合煎,雪上一枝蒿和金不换以不同比例配伍均可减轻雪上一枝蒿诱发的毒性,并且金不换比例越高,减毒效果越好,1:5配伍组镇痛抗炎效果最好,为两者配伍的临床合理用药提供了有效依据。
【图文】：

色谱图,对照品,合煎,色谱峰

1.2.5 配伍前后化学成分变化通过对比雪上一枝蒿与金不换这一药对合并与合煎配伍前后 HPLC 图，发现合并配伍的色谱峰没有明显的变化，而两药合煎液在此色谱条件下的原色谱峰基本消失，并且合煎条件下产生了 4 个明显的新色谱峰，而在前期做的合并液未见上述变化，表明合煎是化学成分变化的原因，并且 4 个新色谱峰的峰面积随着金不换比例的增加而增加。CFA 和 WVBF 的液相图谱在上述色谱条件 A 和 B 下，两种药材中的有效成分均有对应的色谱峰，并且峰形良好，，保留时间相近，不受杂质峰的影响，如图1-1 和 1-2，不同比例合并配伍后，与 CFA 相比，色谱图并没有明显的变化，如图 1-3。

对照品,獐牙菜苦苷,龙胆苦苷,溶液

图 1-2 WVBF 对照品及样品溶液 HPLC 图Fig 1-2 HPLC chromatograms of reference substances(A) and WVBF(B)A：对照品溶液；B：供试品溶液；1：獐牙菜苦苷；2：龙胆苦苷；3：獐牙菜苷
【学位授予单位】：中南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】