基于microRNA调控途径探讨丹皮酚和芍药苷配伍干预急性心肌缺血损伤的作用机制研究

发布时间：2020-06-11 20:12

【摘要】：目的:本研究将丹芍配伍干预急性心肌损伤大鼠心脏组织差异表达的miRNA作为研究的着入点,进而探讨丹芍配伍干预心肌缺血损伤的miRNA调控作用机制。方法:1.构建大鼠急性心肌缺血损伤模型,丹芍配伍进行相应的干预,通过基因芯片筛选模型组及丹芍配伍组大鼠心肌差异表达的microRNA,并用RT-PCR进行验证。2.对差异表达的microRNA进行生物信息学分析,构建miRNA与Gene、GO、Pathway之间的调控网络,得出关键上调和关键下调的microRNA,及主要的信号转导通路。3.构建大鼠急性心肌损伤模型,丹芍配伍进行相应的干预,通过心电监测、心肌梗塞面积的测定、蛋白浓度的测定、western blot等实验对生物信息学预测的结果进行进一步验证,探讨在miRNA的调控网络中丹芍配伍对心肌缺血损伤的保护作用机制。4.建立了大鼠H9c2细胞缺氧模型。丹芍配伍、miRNA-21模拟剂、miRNA-21抑制剂、p38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)干预模型,通过ELISA法检测TNF-α的水平,western blot等实验对MAPK信号通路进行检测,进一步探讨丹芍配伍调控心肌缺血的机制。结果:1.丹芍配伍干预心肌缺血损伤模型时,心肌差异表达的关键microRNA为上调的miRNA-141-3p和下调的miRNA-21-5p、miRNA-92a-3p、miRNA-223-3p。2.在调控网络中最关键的上调miRNA均为miRNA-141-3p,最关键的下调miRNA均为miRNA-21-5p,两者共同调控MAPK signaling pathway这条通路,且这条通路受二者调控的相关性最高。3.丹芍配伍对急性心肌缺血时S-T段的抬高、心肌梗塞面积、血清CKLDH酶活性、MDA含量具有明显的抑制作用,升高SOD活性,抑制p38和JNK信号通路,促进ERK信号通路的活化。4.在H9c2细胞中,丹芍配伍通过调控miRNA-21的表达水平,进一步抑制TNF-α的分泌;丹芍配伍可以抑制p38MAPK信号通路的活化;同时丹芍配伍可以反转miRNA-21模拟剂对p38MAPK信号通路的活化作用;丹芍配伍与miRNA-21抑制剂合用对缺氧激活的p38MAPK信号通路有更显著的抑制作用。结论:1.丹芍配伍干预心肌缺血损伤模型时,最关键的上调miRNA均为miRNA-141-3p,最关键的下调miRNA均为miRNA-21-5p,MAPKs为重要的信号转导通路。2.丹芍配伍可通过抑制p38和JNK信号通路,促进ERK信号通路的活化,发挥保护心肌的重要作用。3.丹芍配伍可通过下调miRNA-21的表达水平,抑制p38MAPK信号通路,抑制心肌缺血时重要炎症因子的分泌和释放,进而发挥对缺血心肌的保护作用。
【图文】：

心肌保护,急性心肌梗死

图 2.1 丹芍配伍对肌缺血 p38 号通路的影响1 假手术组 2 丹芍配伍组 3 模型组 2.2 可以看出，与模型组比较，丹芍组 JNK 的表达最少，说明NK 通路的表达，一定程度上保护了由急性心肌梗死引起的心肌保护心脏的作用。图 2.2 丹芍配伍对肌缺血 JNK 号通路的影响

急性心肌梗死

图 2.1 丹芍配伍对肌缺血 p38 号通路的影响1 假手术组 2 丹芍配伍组 3 模型组2 可以看出，与模型组比较，丹芍组 JNK 的表达最少，，说通路的表达，一定程度上保护了由急性心肌梗死引起的护心脏的作用。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】