氧化苦参碱调节胰腺星状细胞株LTC-14中TLR4相关microRNAs发挥抗炎作用初步研究

发布时间：2020-06-12 22:08

【摘要】：背景慢性胰腺炎(Chronic pancreatitis,CP)各种病因引起胰腺组织和功能不可逆转的慢性炎症性疾病,发病率有逐年增高的趋势。由于其发病机制迄今为止还未明确,所以目前临床治疗上缺乏有针对性的有效药物。近年研究显示,抑制Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路的启动可能有助于CP的防治。而micro RNAs可以在多个水平调节TLR4信号通路。氧化苦参碱(Oxymatrine,OM)是一种药用生物碱,具有抗炎、抗纤维化等多种药理作用,可抑制TLR4信号通路。目的预测靶向TLR4的micro RNAs并验证其是否参与调节TLR4/NF-κB通路;验证目标micro RNAs是否通过调节TLR4/NF-κB通路参与炎症反应的调节从而改善纤维化;探讨OM对TLR4/NF-κB通路以及炎症反应的抑制作用是否通过micro RNAs实现。方法1)生物信息学预测:利用Target Scan7,miranda预测TLR4相关的micro RNAs并查找相关文献/芯片,寻找交集。2)将胰腺星状细胞(LTC-14细胞株)分为4组,Control组,LPS组,OM+LPS组,OM组。通过实时荧光定量PCR(Quantitative Rea-ltime-PCR,q PCR)来筛选目的micro RNAs;利用q PCR、蛋白芯片检测LTC-14细胞内TLR4/NFκB信号通路及炎性因子的变化;并对以上变化进行相关性分析以进一步筛选目的micro RNAs。3)分别通过转染oligo过表达micro RNAs 0 h、24 h、48 h、72 h,于不同时间点通过Western Blot检测TLR4/NF-κB通路的关键节点分子(TLR4、髓样细胞分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子κB的抑制蛋白α(nuclear factor ofkappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor,alpha,IκBα)、核转录因子-kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB))蛋白的表达情况,确定oligo转染的最佳作用时间以及最佳目的micro RNA。4)过表达目的micro RNA,利用ELISA试剂盒测定LPS刺激及micro RNA过表达对炎性因子和纤维化因子的影响。结果LPS刺激激活LTC-14细胞后,micro RNA-145-3p、micro RNA-152、micro RNA-322表达量上升,micro RNA-30b-5p、micro RNA-384-5p、micro RNA-211-5p、micro RNA-126表达量下降;OM干预后,micro RNA-30b-5p、micro RNA-211-5p表达量回升。LPS刺激激活LTC-14细胞后,TLR4/NF-κB通路的关键节点分子(TLR4、My D88、IκBα、NF-κB)及炎性因子(TNF-α、IFNg、IL-1α、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13)m RNA表达水平上升,炎性因子(TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6)分泌量上升;OM干预后炎性因子(TNF-α、IL-1α、IL-2、IL-6)m RNA表达水平回落,炎性因子(TNF-α、IL-6)分泌量下降。在LTC-14细胞内多个micro RNAs与TLR4/NF-κB通路的关键节点分子呈负相关。过表达micro RNA-30b-5p、micro RNA-211-5p、micro RNA-384-5p可以下调LTC-14细胞内TLR4/NF-κB通路的关键节点分子(TLR4、My D88、NF-κB)蛋白表达,过表达micro RNA-30b-5p可以下调LTC-14细胞炎性因子TNF-α和纤维化因子FN、ColⅠ的分泌。结论Micro RNA-30b-5p可能通过抑制TLR4/NF-κB通路的表达,从而减弱LTC-14细胞炎症反应、改善纤维化。OM对LTC-14细胞炎症反应、纤维化的调节可能是通过影响micro RNA-30b-5p而实现的。
【图文】：

细胞内

38图 1. OM 对 LPS 诱导的 LTC-14 细胞内 microRNAs 表达的影响。与 Control 组比较：*P<0.05，**P<0.01；与 LPS 组：比较#P<0.05。

细胞内

39图 2. OM 对 LPS 诱导的 LTC-14 细胞内 microRNAs 表达的影响。与 Control 组比较：*P<0.05，**P<0.01；与 LPS 组比较：#P<0.05，，##P<0.01。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】