莪术油中三种主要活性物质抗H1N1流感病毒作用及机制研究

发布时间：2020-06-14 10:03

【摘要】：高致病性流感病毒对人类造成了严重的公共卫生威胁。尽管已有可用疫苗,但由于耐药病毒株的出现,仍需要抗病毒药物来有效地控制疾病进展和病毒传播。在本研究中,莪术醇、莪术二酮、吉马酮是从中药莪术分离出来的三种主要活性物质,发现其能够抑制流感病毒复制,进一步探究化合物的结构活性部位和体内的相互作用机制,找到作用的靶点和相关通路,从而为流感治疗提供新的依据。我们通过体外实验检测了药物对细胞生长的影响,发现在一定药物浓度内,对细胞没有毒性作用。通过琼脂糖凝胶电泳、半定量PCR、定量PCR、基因报告实验等检测药物抗病毒能力是否具有广谱性,结果发现,在5种病毒中,药物对H1N1病毒作用稳定并呈剂量依赖性。通过定量PCR检测到药物作用于病毒的侵入和复制阶段。在细胞免疫和病毒滴度检测中,发现药物处理后能够抑制病毒NP蛋白表达,病毒粒子减少。通过减少血清、血细胞中病毒滴度和减轻肺组织病变,发现药物对H1N1感染的小鼠具有保护作用,主要作用在感染的早期阶段。三种药物中,吉马酮的抗病毒效果最佳。继而应用基因芯片技术和定量蛋白质组学分析,寻找吉马酮可能作用的基因、蛋白及机制,并通过分子生物学实验对有意义的基因、蛋白进行验证。倍半萜类化合物——莪术醇、莪术二酮、吉马酮——具有抗流感病毒的作用,其中吉马酮的药效最为显著。药物可以影响病毒的侵入和复制阶段,抑制病毒NP蛋白表达、减少病毒粒子。质谱数据分析,吉马酮能够下调病毒诱导产生的TAP1表达来负调控固有免疫应答。研究结果初步揭示了吉马酮抗H1N1流感病毒的作用机制,为吉马酮在抗流感病毒的临床应用开发方面提供了一定的理论支持。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285
【图文】：

莪术醇,细胞增殖,化合物,药理活性

莪术醇、莪术二酮、吉马酮对 MDCK、293T 及 A549 细胞增殖影响。A 为三种 24h 和 48h 对 MDCK 细胞增殖的影响；B 为三种化合物分别在 24h 和 48h 对胞增殖的影响；C 为三种化合物分别在 24h 和 48h 对 A549 细胞增殖的影响。、三种化合物对 H1N1 的抑制作用术油药理活性强、高效、安全，具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌、增强19,20]。药物与病毒共同感染 293T 细胞 24 h 后，半定量 PCR 检测结果够影响 H1N1 病毒复制（图 1.2A）。实验结果表明，这三种化合物对

抗病毒作用,莪术醇,流感病毒,病毒

图 1.2 莪术醇、莪术二酮、吉马酮对 H1N1 流感病毒的抗病毒作用，并呈剂量依赖性。A 和 B分别通过琼脂糖凝胶电泳和定量 PCR 检测了化合物对 H1N1 病毒的抑制作用；C、D 和 E 分别检测了这三种化合物剂量的依赖性，化合物浓度越高抗病毒能力越强。3、药物抗病毒能力具有选择性在发现莪术醇、莪术二酮、吉马酮等药物对 H1N1 病毒的抑制作用后，我们想进一步了解该类药物对其它病毒是否具有相同的作用。利用研究院已有的另外 4种病毒 CVB3、SeV、DENV E、VSV，分别通过荧光显示、核酸凝胶电泳及定量PCR 等方法，检测药物对这四种病毒的抗病毒作用。柯萨奇病毒是一种肠病毒，单股正链小 RNA 病毒，基因长度 7.4kb，是一类常见的经呼吸道和消化道感染人体的病毒，感染后人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状。图 1.3 是药物对 CVB3 病毒在 293T 细胞中的抗病毒作用。由于病毒携带GFP，感染细胞后可直接在荧光显微镜下观察。图1.3A为药物与病毒处理293T细胞 24 h 后，在倒置荧光显微镜下观察到的结果。并通过半定量 PCR 方法对结果

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