堇竹叶制射干炮制目的研究

发布时间：2020-06-14 19:07

【摘要】：目的:本专题以传统古籍文献“射干用堇竹叶煎煮,从午时至亥时,漉出,日干用之”为理论依据,制备射干炮制品,分别从化学成分含量、抗炎活性、血清生化指标及体内药物吸收的角度分析射干生品及炮制品的差异,探讨堇竹叶炮制射干的目的,为射干医学转化提供科学依据。材料与方法:1.采用紫外-可见分光光度法测定炮制前后射干总黄酮含量,比较生品及炮制品总黄酮含量差异。2.采用超高效液相色谱系统(UPLC),以色谱柱:ACQUITY UPLC?BEH C18(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相:0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)-含0.5%甲基-β-环糊精的0.1%磷酸水溶液(C)三相梯度洗脱,流速:0.2m L·min-1,柱温40℃,检测波长为265nm为色谱条件,同时测定炮制前后射干药材主要有效成分射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、鸢尾甲黄素A、鸢尾甲黄素B、野鸢尾黄素、次野鸢尾黄素及白射干素的含量,分析射干生品及炮制品各成分含量差异。3.以雄性大鼠为动物模型,按体重随机分成空白组、模型组、阳性药组、射干生品组及射干炮制品组,采用灌胃给药方式,连续给药7天,于末次给药后30min在大鼠左足趾处注射1%的角叉菜胶,测定角菜胶致炎后不同时间点大鼠的足体积,计算足趾肿胀率,采用SPSS统计软件将各给药组与模型组进行组间t检验,探讨射干生品及其炮制品对大鼠足趾肿胀的抑制作用。4.将大鼠随机分成3组,灌胃给予射干生品、射干炮制品以及等体积的生理盐水,连续给药7天,在末次给药后采集血清样品,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量,探讨射干生品及炮制品对血液生化指标的影响。5.选择比格犬作为实验动物,单次灌胃给予射干炮制品,利用HPLC-MS方法测定血清中射干苷和鸢尾黄素在比格犬体内不同的血药浓度,采用DAS2.0药动学软件进行统计分析,并与前期课题组射干生品的药动学参数进行比较。结果:1.总黄酮含量结果显示,射干炮制品比生品总黄酮含量减少9.89%。2.单体活性成分含量结果显示,射干生品及炮制品中射干苷的含量为5.849mg·g-1、3.102mg·g-1,野鸢尾苷16.74mg·g-1、7.801mg·g-1,鸢尾黄素0.9770mg·g-1、0.8385mg·g-1,鸢尾甲黄素A 1.040mg·g-1、0.7862mg·g-1,鸢尾甲黄素B 0.4290mg·g-1、0.3221mg·g-1,野鸢尾黄素6.992mg·g-1、4.595mg·g-1,次野鸢尾黄素1.433mg·g-1、1.175mg·g-1,白射干素0.3392mg·g-1、0.2725mg·g-1;与生品比较,炮制品中8种活性成分含量均呈下降趋势,分别减少46.96%、53.40%、15.90%、24.40%、24.92%、34.28%、18.00%、19.66%,且制品在8min钟保留时间左右有新异黄酮成分产生,提示堇竹叶炮制射干可能会导致射干化学成分改变。3.大鼠足肿胀实验结果表明:与模型对照组比较,射干生品及炮制品均显著抑制了大鼠的足趾肿胀(P0.05,P0.01),提示射干生品及射干炮制品均有体内抗炎作用;但其炮制品与生品无显著差异(P0.05),表明炮制后射干没有增加抗炎活性。4.血清中ALT和AST实验结果显示:空白组ALT与AST含量分别为24.34±10.0U·L-1、26.41±7.10U·L-1;生品中ALT和AST含量分别为37.96±17.2U·L-1、42.91±18.4U·L-1;炮制品中ALT和AST含量分别为23.11±13.2U·L-1、27.74±13.8U·L-1。射干组大鼠血清中AST、ALT含量显著高于空白组,差异有统计学意义(P0.05),表明射干生品有升高AST、ALT的作用;炮制品组AST和ALT含量均接近空白组,差异无统计学意义(P0.05),射干炮制品组与射干生品组比较,AST和ALT含量显著降低,差异有统计学意义(P0.05),表明射干炮制品有减少AST、ALT的作用。5.药动学实验结果表明:采用LC-MS建立炮制品射干中射干苷和鸢尾黄素分析方法,使2种成分分离良好,检测范围分别为0.0977~31.25ng·m L-1、0.1114~35.63ng·m L-1,低、中、高三个浓度批内及批间精密度、准确度、基质效应均符合要求。血清中2种成分的药代动力学最佳模型为二房室模型,射干炮制品的主要药动参数为:射干苷的Tmax(h)为1.5±0.62,Cmax(ng·m L-1)为5.678±3.723,炮制品中鸢尾黄素Tmax(h)为3.25±1.38,Cmax(ng·m L-1)为16.83±2.78,与前期课题组灌胃给予比格犬射干生品射干苷与鸢尾黄素结果比较,炮制品组射干苷和鸢尾黄素的Tmax(h)与生品组比较均无显著性差异(P0.05),炮制品组射干苷和鸢尾黄素的Cmax与生品组比较均有显著性差异(P0.05),其中炮制品组射干苷的Cmax显著低于射干生品组,炮制品组鸢尾黄素的Cmax略低于生品组。结论:通过对堇竹叶炮制前后射干的化学成分含量、体内抗炎活性及血液生化指标ALT、AST的检测结果分析射干炮制后无明显增效作用,但能减少大鼠对肝脾的损伤,因此推测射干与堇竹叶炮制是一种以减毒作用为主的炮制方法。
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R283
【图文】：

辽宁中医药大学 2017 届硕士学位论文置 5mL 量瓶中，用 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，分别作为炮制前后射干药材的供试品溶液。2.2.3 测定波长的选择[6]取射干苷对照品及供试品溶液适量，置 1cm 吸收池中，以 70%乙醇为随行空白溶剂，分别于紫外分光光度计 200～400nm 波长范围内进行扫描。结果表明，供试品溶液及射干苷对照品溶液均在 265nm 附近处有最大吸收，因此选择在 265nm 波长处进行测定，见图 1-1-1。

图 1-1-2 射干苷的标准曲线度试验取射干炮制品 0.25g，制备供试品溶液，分别精密吸取 6 份，于 265n度。结果 RSD=2.90%（n=6）。结果表明，本方法的精密度良好。结表 1-1-3 精密度试验结果数 1 2 3 4 5 6度 0.443 0.428 0.450 0.424 0.442 0.41% 2.90性试验供试品溶液，于室温下，分别放置 0、2、4、6、8、10h 测定吸光度溶液在 10h 内基本稳定，RSD=1.95%（n=6）。结果见表 1-1-4。表 1-1-4 稳定性试验结果

【参考文献】

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本文编号：2713224