淫羊藿次苷Ⅱ抗脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应研究

发布时间：2020-06-15 00:19

【摘要】：目的:研究ICS Ⅱ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响,并探索其可能的作用机制。方法:体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICS Ⅱ高浓度组(20 μM ICS Ⅱ)、模型组(1 μg/mL LPS)、模型+ICS Ⅱ低浓度组(1 μg/mL LPS+5 μM ICS Ⅱ)、模型+ICS Ⅱ中浓度组(1μg/mL LPS+10 μM ICS Ⅱ)、模型+ICS Ⅱ高浓度组(1 μg/mL LPS+20 μM ICS Ⅱ)、模型+地塞米松组(1 μg/mL LPS+1 μM DXMS)。ICSⅡ(5,10,20 μM)或DXMS(1 μM)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与脂多糖共同作用24 h。采用MTT法检测ICS Ⅱ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICS Ⅱ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α、IL-1β、Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Griess法检测星形胶质细胞中NO的水平;采用蛋白免疫印迹技术检测COX-2、iNOS、I1κB-α、NF-κB(p65)(胞核)、NF-κB(p65)(胞质)、BACE1和APP的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICS Ⅱ与BACE1蛋白的结合情况。结果:ICS Ⅱ(0-50μM)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细μ胞中TNF-α、IL-1β和NO水平均显著上升(P0.05);细胞炎症相关蛋白COX-2、iNOS、NF-κB(p65)(胞核)、BACE1及淀粉样前体蛋白APP表达升高(P0.05);IκB-α、NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P0.05);NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P0.05)。给予ICS Ⅱ能够明显降低TNF-α、IL-1β和NO水平(P0.05),此外,ICS Ⅱ显著下调炎症相关蛋白COX-2、iNOS、NF-κB(胞核)、BACE1及淀粉样前体蛋白APP的表达(P0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P0.05);同时,显著降低NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论:在本实验条件下,ICS Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB/BACE1信号通路对LPS诱导的星形胶质细胞炎症发挥保护作用。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

５０、１００、２００和４００邋ｐＭ）作用于细胞２４邋ｈ、４８邋ｈ和７２邋ｈ，当药物浓度为０？５０邋ｐＭ浓逡逑度时，与空白组细胞活力对比，差异无统计学意义。因此，确定０￣５０ｐＭ浓度是ＩＣＳ逡逑ＩＩ的安全浓度范围（图２Ａ－Ｃ）。本研宄在前期研究的基础上，充分考虑药物的有效逡逑性和安全性后，确定实验中ＩＣＳ邋ＩＩ的作用浓度为５、１０、２０邋ｐＭ，并确定本实验中逡逑ＤＸＭＳ的作用浓度为１邋ｐＭ。逡逑１７逡逑

型组较空Ｓ组细胞中ＮＯ水平显著上升，当给予不同浓度的ＩＣＳ邋ＩＩ作用后，给药组逡逑较模型组ＮＯ水平显漕下调并呈浓度依赖性＾提示ＩＣＳ邋ＩＩ可显著减少ＬＰＳ诱导刺激逡逑的星形胶质细胞中ＮＯ的产生（图４）0逡逑１４－｜逡逑＾１２＂邋＃逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ＋２０邋ＬＰＳ邋＿５逦１０逦２０邋ＤＸＭＳ邋卩Ｍ逡逑￣ＩＣＳ邋ＩＩ￣逦＋邋ＩＣＳ邋ＩＩ逡逑图４邋ＩＣＳ邋ＩＩ减少ＬＰＳ诱导刺激后星形胶质细胞中ＮＯ的水平？用ＬＰＳ邋（１咫／ｍＬ）和ＩＣＳ邋ＩＩ邋（５，１０逡逑和２０ｇＭ）或ＤＸＭＳ（１邋ｇＭ）处理星形胶质细胞２４ｈ；邋ＮＯ水平（ｎ＝５）；与对照组相比，＊＊Ｐ＜０．０１；逡逑与模型组对比＜０．０５，邋＃＃Ｐ＜邋０．０１。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋４邋ＩＣＳ邋ＩＩ邋ｒｅｄｕｃｅｓ邋ＮＯ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．邋Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ逡逑ｗｅｒｅ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＬＰＳ邋（１邋｜ｘｇ／ｍＬ）邋ｗｉｔｈ邋ＩＣＳ邋ＩＩ邋（５，邋１０邋ａｎｄ邋２０邋｜ｘＭ）邋ｏｒ邋ＤＸＭＳ邋（１邋ｊｘＭ）邋ｆｏｒ邋２４邋ｈ．邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ逡逑ｏｆ邋ＮＯ邋（ｎ邋＝邋５）．逦＜０．０１邋ｖｅｒｓｕｓ邋ｕｎｔｒｅａｔｅｄ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｃｅｌｌｓ；邋＃Ｐ邋＜邋０．０５

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本文编号：2713590