对叶百部总生物碱HPLC-UPLC-MS指纹图谱建立及其与产地相关性的研究

发布时间：2020-06-15 07:10

【摘要】：目的:对全国范围内对叶百部产地11个省市自治区31个县市进行了实地考察与样本采集。基于31个产地的对叶百部样本的总生物碱成分进行HPLC指纹图谱研究,并通过超高效液相色谱串联质谱联用技术(UPLC-MS/MS)对31个产地的对叶百部总生物碱的HPLC指纹图谱进行参照峰的指认。建立HPLC指纹图谱与产地之间相关性的联系。为对叶百部药材的质量控制提供实验数据,为更好地开发利用这一传统中药材提供科学的依据。方法:1.通过手持GPS的方法,对全国内11个省市自治区31个县市对对叶百部进行了实地考察与样本采集工作。并对采集的药材按照2015版《中国药典》的方法进行了产地加工处理。2.通过单因素考察的方法,优化了经典的生物碱酸提碱沉法,建立了制备对叶百部总生物碱供试品溶液与指纹图谱的液相色谱条件,对采集的数据进行聚类分析,并建立其指纹图谱,采用国家药典委员会开发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012.1版软件对31批样品分类进行共有峰确认及相似度评价。运用SPSS 22.0统计学软件对其HPLC指纹图谱的参照峰进行主成分因子分析。3.利用超高效液相串联质谱联用的方法,分析HPLC指纹图谱中的参照峰,并进行指认。4.通过完善后的HPLC指纹图谱与产地分布相结合的方法,建立产地与HPLC指纹图谱相结合的对叶百部HPLC指纹图谱评价体系。结果:1.对全国31个产地对叶百部药材进行了详细的生境考察与记录,并对样本进行了处理。2.利用数据分析软件SPSS 22.0及色谱评价系统软件标定出8个稳定性好、吸收强、特征明显的色谱峰作为对叶百部总生物碱HPLC指纹图谱的参照峰,对31批对叶百部分类讨论,将其分为了3大类,且每类的总生物碱指纹图谱相似度均大于0.90。通过主成分因子分析,得到了2个主成分因子,且其占比为78.30%。3.利用超高效液相串联质谱技术,对对叶百部总生物碱HPLC指纹图谱的参照峰进行了指认,并初步定性推测出了金刚大碱、异对叶百部新碱、新对叶百部碱、对叶百部碱、对叶百部碱H和氧化对叶百部碱等6种成分。4.通过产地与HPLC指纹图谱的分类比较,表明对叶百部生物碱成分与含量差异与产地的相关性显著。结论:本实验建立了对叶百部总生物碱的HPLC指纹图谱,采取指纹图谱与指标成分相结合的体系,同时体现了中药材中有效成分整体特征与个体特征的关联性,产地与成分差异的关联性,得以更好的控制药材质量,为对叶百部药材质量标准的进一步优化和完善提供数据支持,并为其品质、评价开发利用提供理论依据。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1
【图文】：

分布情况,分布情况,百部,上市量

图 1-1 全国对叶百部分布情况结果表明，对叶百部一般生长在海拔 30～1320m 左右的石缝丛、林下、溪边等阴凉潮湿可攀附于其它植物生长的环境。对叶的主要来源还是以野生采集为主，而且药用部位为根，采收往往将整株百部全部挖出，破坏性采收致使该植物的可持续发展受到重制约。在多次市场调研的过程中，发现其上市量逐渐减少，常常供不，从而导致价格不断上升。百部在自然环境中条件适宜非常易于，但是在本次全国范围内采集的过程中，除广西壮族自治区和海产外，其他各地的野生对叶百部采集都都十分困难，其野外资源

最佳色谱条件,溶液制备,湖南省,道县

图 2-1 最佳色谱条件下和供试品溶液制备方法下的对叶百部 HPLC 图谱（湖南省永州市道县 S3）6 对叶百部 HPLC 指纹图谱的方法学考察6.1 精密度考察取同一批湖南省永州市道县（S3）药材粉末 5 份，每份 5.00g，精密称定，按“5”下的方法制备对叶百部总生物碱供试品溶液，分别进样，以“3”的色谱条件进行洗脱，记录各色谱图和 8 个参照峰的保留时间和峰面积。以色谱峰（6 号）作为参考峰，计算精密度 HPLC 图谱中 8 个参

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