酶解法提取鹿茸多肽及其抗炎活性研究

发布时间：2020-06-18 00:10

【摘要】：鹿茸自古以来是我国贵重的药材,主要功效有补肾填精、强筋健骨、调节机体,对耳聋耳鸣也有着不错的治疗效果。研究表明鹿茸具有抗炎的作用功效,本研究围绕鹿茸多肽的抗炎活性展开。首先取新鲜的双阳梅花鹿(Cervus nippon)鹿茸,分别用超声助提法和CO_2超临界提取法提取鹿茸蛋白多肽。通过比对不同提取工艺的提取率,进一步确定鹿茸总蛋白的提取工艺:超声助提法对鹿茸总蛋白的提取率为2.81%,CO_2超临界提取法对鹿茸总蛋白的提取率为3.93%,CO_2超临界提取法对鹿茸总蛋白的提取率要优于超声助提法的提取率。将提取出的鹿茸蛋白分别通过胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶及复合蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶复合物)进行酶解,并通过单因素分析及甲醛滴定法确定鹿茸酶解的最佳工艺,得到最佳酶解工艺为:以鹿茸蛋白为水解底物,其浓度为3%,通过复合酶酶解,酶解温度为50℃、酶解时间为3h。构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)细胞抗炎模型,对各种工艺酶解后的鹿茸多肽抗炎效果进行评估。各工艺酶解后的鹿茸多肽在给药25mg时抗炎效果最佳,其抗炎效果为:复合酶酶解后鹿茸多肽抗炎活性中性蛋白酶酶解后鹿茸多肽抗炎活性胰蛋白酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性碱性蛋白酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性胃蛋白酶酶解后鹿茸多肽抗炎活性未酶解鹿茸总蛋白抗炎活性。之后对复合酶酶解后得到的鹿茸多肽进行SDS-PAGE凝胶电泳,从凝胶电泳结果我们看出经过复合酶酶解后,大分子鹿茸多肽被大量酶解,酶解后的鹿茸多肽分子量大约在4~15kDa。经过复合酶酶解后的鹿茸多肽通过凝胶层析法分离出20种单体多肽,通过构建NIH3T3体外细胞抗炎模型对20种多肽的抗炎活性进行考察,共计筛选出13种具有抗炎活性的多肽,将此13种具有抗炎活性的多肽进行测序,并与NCBI数据比对,分析其功能。在给药计量相同的情况下将13种多肽的抗炎效果与复合酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性进行比对,得出结论单体多肽的抗炎活性低于复合酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性,我们推断鹿茸的抗炎效果是多种多肽共同作用的结果,单一蛋白多肽并不能有效的抑制炎症发生。本研究为鹿茸的利用及其相关鹿茸产品的开发奠定了一定基础,对鹿业的进一步发展有重要意义。对鹿茸中有效物质的功效研究及鹿茸产品开发提供思路和理论依据,并奠定一定的实验数据基础。
【学位授予单位】：长春工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R284
【图文】：

鹿茸,碱性蛋白酶,浓度,鹿茸多肽

胃蛋白酶在不同鹿茸多肽浓度下对蛋白水解度的影响度保持 50℃不发生变化，在所需酶解溶液到达 50℃后，在溶液中加，并以不同浓度的蛋白底物——鹿茸总蛋白进行酶解，水解时间为 4为 500mL，结果见图 3.2。当底物鹿茸蛋白的浓度超过 3%时，水解增加而增加，并且还有降低的趋势。综合考虑到蛋白酶和鹿茸的成本人力的关系，最终通过实验得出胃蛋白酶水解鹿茸多肽底物最佳适

鹿茸,胃蛋白酶,浓度,鹿茸多肽

图 3.1 碱性蛋白酶在不同鹿茸多肽浓度下对蛋白水解度的影响胃蛋白酶在不同鹿茸多肽浓度下对蛋白水解度的影响保持 50℃不发生变化，在所需酶解溶液到达 50℃后，在溶液中加入并以不同浓度的蛋白底物——鹿茸总蛋白进行酶解，水解时间为 4h，为 500mL，结果见图 3.2。当底物鹿茸蛋白的浓度超过 3%时，水解度加而增加，并且还有降低的趋势。综合考虑到蛋白酶和鹿茸的成本以人力的关系，最终通过实验得出胃蛋白酶水解鹿茸多肽底物最佳适合

【参考文献】