环氧广藿香烯抗炎及抗胃溃疡的药效及机制研究

发布时间：2020-06-18 00:51

【摘要】：目的:本研究在广藿香油质量检查的过程中发现在标准储存条件下分别储存一年和十年的两份同源的广藿香油样品的成分存在差异。其中,在储存时间达十年的样品中存在一种含量较多的未知成分,而该成分在另一样品中并不存在。应用精馏-柱层析法分离纯化该成分并进行结构解析,确认该成分为环氧广藿香烯。关于环氧广藿香烯的研究报道并不多,主要集中在化学合成领域,鲜见药理活性方面的研究,这在一定程度上限制了环氧广藿香烯的实际应用。本研究致力于开发环氧广藿香烯的药理活性。首先,基于环氧广藿香烯属于厑类化合物(具有典型的五元环与七元环骈合而成的芳香骨架),而厑类化合物往往具有良好的抗炎活性,因此,本研究拟探究环氧广藿香烯的体内外抗炎活性。此外,现代药理学研究表明广藿香烯具有良好的抗胃溃疡活性,鉴于环氧广藿香烯的化学结构与广藿香烯相似,本研究也探究其潜在的胃粘膜保护作用。方法:1.环氧广藿香烯的体外抗炎活性研究本研究应用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞模型评价环氧广藿香烯的体外抗炎活性。通过测定TNF-α,IL-1β,IL-12和MCP-1等促炎细胞因子的含量和mRNA水平以及检测COX-2和iNOS信号通路的表达衡量环氧广藿香烯的抗炎作用。2.环氧广藿香烯的体内抗炎活性研究本研究主要通过二甲苯致小鼠耳肿胀模型,醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增强模型和角叉菜胶致小鼠足肿胀模型来评估环氧广藿香烯的体内抗炎活性,并进一步利用角叉菜胶致小鼠足肿胀模型探究环氧广藿香烯的体内抗炎机制。测定小鼠足组织中TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-4,IL-10,PGE2和NO等抗炎/促炎细胞因子的含量,同时检测COX-2和iNOS蛋白及mRNA表达量。此外,本研究还应用免疫印迹法分析NF-κB信号传导途径的相关蛋白表达。3.环氧广藿香烯的胃保护作用研究本研究采用乙醇诱导大鼠胃溃疡模型。首先,结合肉眼观察和组织学评价宏观评价环氧广藿香烯的胃粘膜保护活性。然后从炎症反应,氧化应激反应,细胞凋亡和胃粘膜防御作用阐明环氧广藿香烯抗胃溃疡的作用机制。具体而言,检测TNF-α,IL-1β,IL-10和NF-κB通路相关蛋白以评价环氧广藿香烯在胃组织中的抗炎活性;检测GSH,SOD,CAT和MDA以评价环氧广藿香烯在胃组织中的抗氧化活性;检测Caspase-3,Fas和Fasl以评价环氧广藿香烯在胃组织中的抗凋亡活性;检测PGE_2和NO水平以评价环氧广藿香烯对胃粘膜防御能力的增强作用。结果:1.环氧广藿香烯的体外抗炎作用评价实验结果显示,环氧广藿香烯可显著抑制TNF-α,IL-1β,IL-12和MCP-1等促炎细胞因子的蛋白和mRNA表达且呈剂量依赖性关系。此外,Real-time PCR结果也表明环氧广藿香烯能够明显减少iNOS和COX-2 mRNA表达量,从而降低RAW264.7细胞中NO和PGE_2的含量。2.环氧广藿香烯的体内抗炎活性评价实验结果表明,环氧广藿香烯的半数致死量大于10 g/kg,表明其具有较高的安全性。同时,环氧广藿香烯能显著抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀,降低醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增强以及抑制角叉菜胶诱发的小鼠足肿胀。在抗炎机制研究方面,环氧广藿香烯显著地降低了足组织中TNF-α,IL-1β和IL-6等促炎细胞因子的水平,但同时能使抗炎细胞因子如IL-4和IL-10的含量增加。此外,环氧广藿香烯能明显下调COX-2和iNOS信号通路的表达。免疫印迹结果表明,环氧广藿香烯还能通过抑制IKKβ和IκBα的磷酸化控制炎症过程中NF-κB(p50和p65)从细胞质向细胞核的转移。3.环氧广藿香烯的胃粘膜保护作用评价实验结果显示,环氧广藿香烯能有效减少乙醇所致胃溃疡的溃疡面积,该实验结果与组织学评价结果一致。在阐明其胃保护作用机制方面,环氧广藿香烯有显著的抗炎活性,能逆转胃溃疡组织中促炎和抗炎细胞因子之间的失衡状态和调节NF-κB通路中p-IκBα,IκBα,p-p65和p65等指标的蛋白表达。此外,环氧广藿香烯能明显增加GSH,SOD和CAT等抗氧化酶的表达并下调MDA的含量,这表明它对胃溃疡组织中存在的脂质过氧化反应有显著的抑制作用。同时,免疫组织化学分析结果也表明环氧广藿香烯具有较强的抗凋亡活性,能下调caspase-3,Fas和Fasl等凋亡蛋白的表达。最后,本研究还证明环氧广藿香烯可以恢复溃疡组织中PGE_2和NO的正常含量以增强胃粘膜对攻击因子的防御能力。结论:本研究首次从久置的广藿香油中发现并成功分离提纯环氧广藿香烯,并证实其较高的安全性。此外,实验结果表明,环氧广藿香烯具有显著的体内外抗炎活性,同时还具有显著的胃粘膜保护作用,能对抗乙醇所致胃粘膜损伤,相关抗溃疡机制与它的抗炎,抗氧化应激,抗凋亡活性以及黏膜保护作用有关。
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【图文】：

储存期,图谱,样品

谱分析：（A）储存期为一年的广藿香油样品的 GC-MS 图谱的 GC-MS 图谱；（C）从储存期为十年的广藿香油样品中分图谱。在 GC-MS 图谱的峰上显示的数字对应于表 1 所示sis. (A) GC-MS analysis of fresh patchouli oil with one-year stoatchouli oil with ten-year storage time. Numbers indicated on p) GC-MS analysis of the unknown compound isolated from stal

化学结构鉴定,广藿香,环氧,草属

广藿香烯(PAO)化学结构鉴定。(A) PAO的化学结构; (B) PAO的1H-1H COSY和C) PAO的NOESY相关。entification of patchoulene epoxide (PAO). The chemical structure of PAO (A); KeMBC correlations of PAO (B); Key NOESY correlations of PAO (C).是唇形科剌蕊草属多年生芳香草本或半灌木，源产于马来西亚、菲，目前在我国的亚热带地区如两广，海南等地均有广泛种植[87]。广

【参考文献】