应用白藜芦醇治疗帕金森症A53T转基因小鼠的作用研究

发布时间：2020-06-20 04:46

【摘要】：帕金森症(PD)是一种神经退行性疾病,其病理特征是黑质致密部多巴胺能神经元的逐渐丧失和路易氏病理学。路易氏病理学指的是α-synuclein的异常聚集,在PD病理生理学方面扮演着关键角色。帕金森症发病机制的复杂性给临床治疗带来了巨大挑战,目前的临床药物还不能阻止或延缓神经退行性病的进程,因此,寻求新的治疗方法及治疗药物已迫在眉睫。据报道姜黄素、海藻糖等天然化合物对于突触核蛋白有抑制作用,然而治疗效果并不明显。白藜芦醇(RV)作为一种具有多种生物活性的多酚类化合物,具有多种生物学功能如心脏保护、抗炎和抗氧化等。新近研究显示,白藜芦醇还能预防多种神经退行性疾病及其相关并发症。但是,就白藜芦醇对帕金森症的治疗和预防效果及其机制尚未完全阐明。基于以上研究背景,本试验分别通过体外、体内试验检测白藜芦醇对于α-synclein的影响。在体外试验中,采用硫磺素荧光(ThT)、透射电子显微镜观察白藜芦醇对于α-synclein聚集的影响,进一步采用细胞活性实验检测白藜芦醇对于神经细胞的影响。在体内试验中,通过动物行为学研究白藜芦醇对动物行为协调能力以及认知水平的调控作用:运用Western blot、Dotblot的手段检测白藜芦醇对于转基因小鼠脑内总α-synclein和α-synclein寡聚体水平,并且通过免疫组织化学检测与PD相关的病理生化变化;利用免疫组织化学、ELISA的方法验证白藜芦醇对炎症水平和氧化应激水平的影响,从而揭示白藜芦醇治疗帕金森症的机制。研究结果如下:(1)通过对α-synuc 1 ein寡聚体的构象和分子水平检测发现,低浓度和高浓度的白藜芦醇对于α-synuclein寡聚体都有抑制作用,且高浓度白藜芦醇浓度抑制寡聚体的聚集效果更加明显。细胞水平显示,α-synuclein对于神经细胞有毒性作用,而高剂量的白藜芦醇显著增强了细胞活性;(2)通过旷场实验、爬竿实验、抱爪实验等动物实验研究发现,白藜芦醇处理的A53T转基因小鼠运动障碍得到明显改善;并且在新事物认知实验、Y迷宫实验也证实转基因小鼠的认知障碍得到有效缓解;(3)通过Western blot、Dot blot试验发现,白藜芦醇可以降低A53T转基因小鼠脑内α-synuclein水平,也通过免疫组织化学手段验证了磷酸化的-αsynuclein减少,而络氨酸羟化酶明显增多;(4)通过EIISA、免疫组织化学结果显示,白藜芦醇抑制了星形胶质、小胶质细胞的激活,降低了小鼠相关炎性因子及活性氧水平,从而抑制了转基因小鼠的炎症反应,降低了氧化应激水平。综合以上研究结果,阐明了白藜芦醇治疗帕金森症的作用为:白藜芦醇有效的降低了 α-synuclein的聚集并且缓解了 α-synuclein聚集引发的神经细胞死亡,提高了细胞存活率;动物行为学研究中显示,白藜芦醇改善了转基因小鼠的运动障碍和认知缺陷;同时,白藜芦醇有效降低了总α-synuclein与寡聚体的水平以及改变了 PD相关病理生化指标;并且有效降低了转基因小鼠的炎症反应及氧化应激反应。
【学位授予单位】：宁夏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

醇按摩尔比为１：１时，在视野中，小的长丝状纤维比较少，小的纤维或者短链状寡聚体比较逡逑多。当ｃｃ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ与白叕芦醇按摩尔比为１：５时，在视野中，小的纤维或者短链状寡聚体较逡逑少，大部分以单体的形式存在（图２－１Ｂ）。ａ－ｓｙｎｕｄｅｉｎ与ｄ藜芦醇按摩尔比为１：５时，抑制效逡逑果明显，结果显示透射电镜的结果和ＴｈＴ的结果趋势一致。逡逑２．４．３细胞活性实验（ＭＴＴ）检测白藜芦醇对于ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞的保护作用逡逑我们己经证明白藜芦醇对于淀粉样蛋白的抑制情况，进一步验证这种抑制效果对于细胞逡逑毒性的影响，这里我们采用ＭＴＴ的方法进行验证。结果如图（２－１邋Ｃ）显示，当细胞与ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ逡逑共孵育的情况下，细胞活性降低了邋３８．０４％，我们得出的结论与之前文献报道一致，即ａ－逡逑ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ寡聚体是最具有细胞毒性的，当加入１０邋ｎＭ的白藜芦醇时，细胞的活性率升高至逡逑７０％，但是与对照组无明显差异，当加入５０ｐＭ的白藜芦醇时，细胞的活性与ｏｉ－ｓｙｎｕｄｅｉｎ组逡逑相比升高了丨９．７３％，与对照组有显著差异。我们同样发现，随着白藜芦醇对于ａ－ｓｙｍｉｄｅｉｎ逡逑的抑制

Ａ５３Ｔ转基因小鼠是科学研宄中常用的ＰＤ转基因动物模型，可以间接反应帕金森症患逡逑者的各项行为能力指标。本论文采用旷场实验检测白藜芦醇对Ａ５３Ｔ转基因小鼠的影响，结逡逑果如图３－２所示：与ＷＴ－Ｖｅｈ和ＷＴ－ＲＶ组小鼠相比，Ａ５３丁转基因小鼠运动的总路程更长逡逑（图３－２Ａ），速度更快（图３－２Ｂ），站立次数更频繁（图３－２Ｃ），说明Ａ５３Ｔ转基因小鼠比ＷＴ－Ｖｅｈ逡逑和ＷＴ－ＲＶ组小鼠更活跃，这与先前报道一致而治疗组小鼠在总路程、速度和站立次数逡逑方面都显著减少（图３－２Ａ－Ｃ），证明白藜芦醇可以改善ＰＤ小鼠在新异环境中的自主行为。逡逑进一步采用爬杆试验检测白藜芦醇对Ａ５３Ｔ转基因小鼠动作协调性和平衡性的影响。己逡逑有研宄表明ＰＤ小鼠发病后，后肢呈抱紧的症状。实验结果表明，Ａ５３Ｔ转基因小鼠爬回笼逡逑１４逡逑

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 张丽;陈炜;张旭;孙秀萍;杨亚军;张连峰;;携带A53T突变人α突触核蛋白转基因帕金森病大鼠模型的建立[J];中国比较医学杂志;2013年10期

2 王颖;钱进军;赵康仁;马瑞;徐敏芳;熊御云;高静;;突变A53Tα-synuclein基因核输入信号和核输出信号真核载体的构建及表达分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年06期

3 兰丹梅;邬剑军;苏雅茹;陈[?;蒋雨平;王坚;;人野生型和A53T突变型α-突触核蛋白慢病毒表达载体的构建及在PC12细胞中的转染[J];神经解剖学杂志;2009年03期

4 喻哲明;丁正同;任惠民;邬剑军;王坚;陈[?;;β淀粉样蛋白_(1-42)促进转染人α-突触核蛋白A53T突变基因的PC12细胞内α-突触核蛋白的表达[J];中国临床神经科学;2011年06期

5 东惟玲;方琪;张秀艳;赵昀;单立冬;惠国桢;;稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-突触核蛋白单克隆SH-SY5Y细胞株的建立[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2016年06期

6 章素芳;李丽喜;倪俊;乐卫东;;模拟帕金森病的表达人α-synuclein~(A53T)转基因小鼠的早期嗅觉功能观察[J];上海交通大学学报(医学版);2012年08期

7 东惟玲;方琪;王达鹏;周峗;单青婷;惠国桢;单立冬;;过表达A53T突变型α-synuclein细胞毒性及对损伤性刺激的影响[J];中华神经外科疾病研究杂志;2016年01期

8 赵静;张伟;马杰;张海飞;尉杰忠;柴智;宋丽娟;肖保国;马存根;;新型Rho激酶抑制剂FSD-C10对A53T细胞突起的作用[J];中国实用神经疾病杂志;2017年11期

9 万晓梅;焦璐琰;聂齐;吴婷;唐晓璐;郑嵋戈;林贤;;PD模型小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein基因对外周单核细胞浸润的影响[J];解剖学研究;2017年03期

10 郭曼莉;高玉元;张晴曦;聂坤;王丽娟;;Aβ_(1-42)寡聚体对α-syn过表达SHSY5Y~(A53T)细胞自噬功能的影响[J];中国神经精神疾病杂志;2019年07期

相关会议论文 前3条

1 王萍;白嘎丽;白小燕;晏燕;;α-突触核蛋白A53T基因多态性与帕金森病相关性研究[A];7th中华医学会神经病学分会全国中青年神经病学学术大会暨第十届全国神经系统感染性疾病与脑脊液细胞学学术大会论文汇编[C];2014年

2 王莹;和青;郁文博;王艺璇;邬剑军;丁正同;肖保国;王坚;;海藻糖减缓黑质过表达A53T α-synuclein的大鼠PD模型中的神经退行性变[A];中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（下）[C];2015年

3 赵大龙;邹莉波;朱海波;;A53T突变型人α-synuclein转基因细胞模型构建及鉴定[A];药物相关蛋白质组学专题研讨会论文集[C];2006年

相关博士学位论文 前4条

1 兰丹梅;海藻糖对未转染和已转染人野生型或A53T突变型α突触核蛋白基因的PC12细胞的促自噬作用研究[D];复旦大学;2009年

2 焦璐琰;Tau缺失加剧A53T α-Synuclein诱导的中脑黑质网状部神经退变及其机制的研究[D];中山大学;2016年

3 陈蕾;α-突触核蛋白病SNCA基因A30P和A53T的突变筛查[D];天津医科大学;2009年

4 钱进军;MPP+对过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein PC12细胞的毒性作用及DAT膜表达的影响[D];苏州大学;2007年

相关硕士学位论文 前5条

1 张力凡;应用白藜芦醇治疗帕金森症A53T转基因小鼠的作用研究[D];宁夏大学;2019年

2 刘丰韬;葡萄糖调节蛋白75在A53T突变α-突触核蛋白致帕金森病线粒体损伤中的作用及机制研究[D];复旦大学;2012年

3 任梦丹;A53T突变对α-synuclein错误折叠和聚集影响的分子模拟研究[D];兰州大学;2017年

4 赵晨阳;携带人突变型alpha-突触核蛋白(A53T)帕金森病转基因小鼠运动功能及胃肠功能的评价研究[D];青岛大学;2015年

5 刘其;Alpha-突触核蛋白A53T转基因帕金森病模型小鼠早期嗅觉及学习记忆能力的研究[D];青岛大学;2016年

本文编号：2721891