黔产莪术油成分分析及其对直肠癌SW1463细胞株凋亡因子的影响研究

发布时间：2020-06-20 15:29

【摘要】：目的:利用GC-MS法分析比较四种炮制品的黔产莪术中挥发油含量及其化学成分的差别,确定黔产莪术油中所含的主要成分,并比较四者所含化学成分的异同;研究莪术油对直肠癌SW1463细胞株的增殖抑制作用,并探讨其对直肠癌SW1463细胞株抑制作用的可能机制。方法:通过水蒸气蒸馏法提取不同炮制类型的黔产莪术饮片中挥发油类成分,采用GC-MS法对黔产莪术油的化学成分进行分析,通过标准谱库检索分析计算,确定黔产莪术挥发油中所含的主要成分。将经水蒸气蒸馏提取的莪术挥发油,配制成40、80、120、160、200、240、280 mg·L-1等梯度浓度,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度莪术油干预直肠癌SW1463细胞24、48、72h后对细胞增殖抑制的影响,计算莪术油对细胞的抑制率及IC50;根据药物的IC50设定浓度为80,120,160,200 mg·L-1的梯度剂量组干预细胞24h,采用倒置显微镜观察不同浓度莪术油对直肠癌SW1463细胞的形态学影响,Giemsa染色法观察莪术油对SW1463细胞增殖凋亡形态学的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测莪术油对直肠癌细胞内Capase-3,Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。结果:从4种莪术饮片中共检测出78种化学成分,其中鲜品莪术挥发油中有58个化学成分,生切饮片挥发油中有53个化学成分,蒸制饮片挥发油中有52个化学成分,醋炙莪术挥发油中有51个化学成分。挥发油中的主要成分为单萜和倍半萜类,但是不同炮制法制备的黔产莪术中挥发油的含量及其成分组成存在较大的差异。MTT比色法检测发现莪术油对SW1463细胞增殖有明显的抑制作用,并呈一定的时间-剂量依赖性,24 h、48 h和72 h的半数抑制率(IC50)分别为144.33、134.11、120.04 mg·L-1;Giemsa染色可见细胞明显的凋亡形态学特征;Western blot表明,莪术油干预SW1463细胞株24 h后,与阴性对照组比较,Caspase-3、Bax的蛋白表达上调(P㩳0.05,P㩳0.05),Bcl-2的蛋白表达下调(P㩳0.05),差异有统计学意义。结论:1.黔产莪术油的主要成分为单萜和倍半萜类,不同炮制法制备的黔产莪术挥发油的含量及其成分组成存在较大差异。2.不同浓度的黔产莪术油对直肠癌SW1463细胞增殖有一定的抑制作用,且随着时间的增长及浓度增高而增强,呈一定的时间-剂量依赖性。3.黔产莪术油可明显抑制直肠癌SW1463细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3和Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达相关。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285
【图文】：

吐温-80,细胞增殖

图 2-5 吐温-80 对 SW1463 细胞增殖的影响Fig. 2-5 The effect of Tween-80 on SW1463 cell line实验结果显示，当 Tween-80 浓度低于 0.012%时，各时间点内 OD 值与阴性对照组比较差异并无显著性，表明在此浓度范围内 Tween-80 对细胞的增殖并无明显影响，但当 Tween-80 浓度大于或等于 0.012%时，其 OD 值与阴性对照组比

莪术油,细胞增殖,肠癌,细胞形态学

图 2-6 莪术油对 SW1463 细胞增殖的影响Fig. 2-6 Effect of zedoary turmeric oil on proliferation ofSW1463 cells2.5 黔产莪术油对直肠癌 SW1463 细胞形态学的影响正常情况下，SW1463 细胞呈梭形或椭圆形，贴壁生长，细胞长势良好，胞

【参考文献】