三七粉延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制及其稳定性研究

发布时间：2020-06-20 15:09

【摘要】：目的:探究大剂量下不同粒度的三七对秀丽隐杆线虫的毒副作用,确定三七的安全给药剂量;研究三七对秀丽线虫的长寿效应及其可能的分子机制,确定最佳粉碎粒度;研究不同粒度三七中皂苷类成分体外溶出度及稳定性,为三七粉的临床应用和进一步的新剂型新制剂开发提供一定的理论依据。方法:采用秀丽隐杆线虫为模型,以10,20,40 mg/mL三七醇提物对线虫急性暴露48 h和1,2,4 mg/mL三七醇提物对线虫长期暴露8 d后,检测各组线虫生存率、后代数、体长、运动行为、细胞凋亡数、ROS水平等指标,确定三七的安全给药剂量。以0.8,1.6 mg/mL三七醇提物对秀丽线虫给药4 d,测定各组线虫寿命、后代数,确定三七最佳给药粒度;以三七细粉给药,测定线虫在急性氧化应激和急性热应激条件下的生存率,测定氧化应激1 h后线虫体内ROS水平,测定线虫体内脂质含量、SOD活力水平和CAT活力水平,测定线虫体内衰老相关基因的表达水平,测定三七对转基因线虫CL2070体内HSP-16.2∷GFP和转基因线虫CF1553体内SOD-3∷GFP表达的影响,测定氧化应激条件下三七对转基因线虫CF1038和CB1370寿命的影响,从而观察三七对秀丽线虫的抗衰老作用,及对IIS信号通路调节的影响。研究不同粒度三七中皂苷类成分在不同pH溶液中的溶出情况,测定不同粒度三七的加速稳定性,为三七粉进一步开发提供参考。结果:(1)以10,20,40 mg/mL三七醇提物对线虫急性暴露48 h,均降低了线虫的生存率、生殖能力和运动能力,增加了线虫体内细胞凋亡数目和自由基数量,且40 mg/mL三七细粉组表现最为显著。(2)以1,2,4mg/mL三七醇提物对线虫长期暴露8 d,仅4 mg/mL组降低了线虫的生存率、生殖能力和运动能力,增加了线虫体内细胞凋亡数和自由基数量,且以细粉组表现最显著,1,2 mg/mL组各指标均未表现出明显的毒副作用。(3)以0.8,1.6 mg/mL三七醇提物对秀丽线虫给药,延长了线虫的寿命,同时不影响线虫的生殖能力。以三七细粉醇提物给药,与对照组相比,增加了线虫在急性氧化应激和急性热应激条件下的存活率,降低了线虫体内油脂含量和氧化应激后体内ROS水平,增加了线虫体内SOD活力和CAT活力。(4)与对照组相比,三七细粉醇提物给药组线虫体内daf-2 mRNA表达量显著下调,daf-16、sod-3、hsp-16.2 mRNA表达量显著上调,且转基因线虫CL2070体内HSP-16.2∷GFP和CF1553体内SOD-3∷GFP表达量显著性增加,daf-2和daf-16转基因型线虫寿命无显著性影响。(5)在pH=1的盐酸溶液中,三七粉中主要含有的3种皂苷均迅速被降解,未能测出其溶出曲线;在纯水、pH=4.5和pH=6.8的缓冲溶液中,三七中粉和细粉溶出率和溶出速度均高于三七粗粉,但中粉和细粉溶出度相差不大;在三种溶出介质中,pH越高,三七总皂苷的累计溶出率越高。在加速试验中,不同粒度三七粉末稳定性基本一致。结论:通过大剂量(10,20,40 mg/mL)三七醇提物对线虫急性暴露48 h,结果表明三七大剂量给药有一定的毒副作用,且细粉效果最显著;通过1,2,4 mg/mL三七醇提物对线长期暴露8 d,表明以三七对线虫给药的安全剂量在2 mg/mL以下。以0.8,1.6 mg/mL三七对线虫给药,结果表明三七可延长线虫的寿命,具有一定的抗衰老作用,且三七细粉抗衰老作用最强,可能是通过调节IIS信号通路实现的。三七中粉和细粉的溶出度和稳定性基本一致,结合药效学研究,建议使用三七细粉口服,为三七散剂进一步开发提供参考。
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

三七,高效液相,含量测定,粒度

图 1 不同粒度三七样品含量测定的高效液相图谱注：a. 三七皂苷 R1，b.人参皂苷 Rg1，c.人参皂苷 Rb1存率的影响剂量（10，20，40 mg/mL）三七粗粉、中粉、细粉和极急性暴露 48 h 后，各组线虫生存率均有所降低，见图比，粗粉 20，40 mg/mL 剂量组和中粉 20 mg/mL 剂量组P<0.05）；中粉 40 mg/mL 剂量组、细粉和极细粉各剂著下降（P<0.01）。各剂量细粉和极细粉组线虫生存率存率相比，均显著降低（P<0.05），但各剂量细粉和极相比较均无显著性差异（P>0.05）。剂量（1，2，4 mg/mL）三七粗粉、中粉、细粉和极细暴露 8 d，各组线虫生存率情况，如图 2，B 所示。与

三七,醇提物,对线,粒度

图 2 不同粒度三七醇提物对线虫生存率的影响注：A.急性暴露 48 h，B.长期暴露慢性给药 8 d与对照组相比，* P<0.05，** P<0.01，下同。的影响量（10，20，40 mg/mL）三七粗粉、中粉、细粉醇提8 h，各组线虫运动情况，如图 3，A 和 B 所示。与对照剂量下，仅三七细粉组线虫身体弯曲频率和头部摆动；20，40 mg/mL 剂量下，三七粗粉、中粉、细粉组下降（P<0.01），头部摆动频率也下降（P<0.01）。量（1，2，4 mg/mL）三七粗粉、中粉、细粉醇提物d，各组线虫头部摆动频率如图 3，C 所示。不同粒度

【相似文献】