【摘要】：【目的】1.通过整理缺血性中风恢复期证素相关文献,总结恢复期证素之间的关联,了解其病因病机的演变,并为后续实验研究提供一定依据。2.观察健脾补土组方对体外胎鼠原代皮层神经细胞低氧损伤后凋亡及INT-FAK通路下游凋亡相关Bax、Bcl-2、MEK、Erk2表达的影响,探讨健脾补土方对神经细胞凋亡的干预机理。【方法】1.基于文献研究对缺血性中风恢复期证素进行关联分析:采用计算机检索方法,检索2007年~2017年中国生物医学文献数据库(CBM)、相关期刊论文(CNKI)、维普期刊资源整合服务平台(VIP)中关于缺血性脑中风恢复期证素的相关文献进行收集整理,应用SQL Server 2012MAddin数据挖掘软件、采用Apriori算法对缺血性中风恢复期的证素进行关联规则分析处理,总结缺血性脑中风恢复期常见证素及其之间的关联。2.分离孕17d SD大鼠的胎鼠原代神经元,接种于六孔板中培养,并分为A正常血清对照组、B低氧损伤模型组、C低氧+神经生长因子组、D低氧+健脾补土血清组、E低氧+健脾补土血清+FAK抑制剂组5组。采用培养箱低氧/复氧的方法诱导后四组标本神经元凋亡形成脑缺血损伤模型,运用流式细胞术检测神经元凋亡情况,RT-q PCR法检测Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA的表达,Western blot和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2、MEK、Erk2蛋白的表达。【结果】1.关联分析结果:缺血性中风恢复期常见的病位证素主要有5个,分别为:脑、心、脾、肾、肝;病性证素主要有4个,分别为:气虚、血瘀、痰浊、阴虚。(1)病位证素关联:脑与心的关联性最高,其次依次为脑与肾、脑与脾、心与脾等。(2)病性证素关联:关联性最高的是气虚与血瘀,其次依次为血瘀与痰浊、气虚+痰浊与血瘀、气虚与痰浊、阴虚与血瘀。2.体外实验:(1)神经元凋亡率:与正常血清对照组比较,低氧损伤模型组凋亡率明显增加,差异具有统计学意义(P0.01);与低氧损伤模型组比较,低氧+神经生长因子组和低氧+健脾补土血清组均显著减少,差异有统计学意义(P0.05);与低氧+神经生长因子组比较,健脾补土组相对减少,差异无明显统计学意义(P0.05);与低氧+健脾补土血清组比较,低氧+健脾补土血清+FAK抑制剂组神经元凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。(2)Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA与蛋白表达情况:与正常血清对照组比较,低氧损伤模型组神经元Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显减少,差异均有统计学意义(P0.01);与低氧损伤模型组比较,低氧+神经生长因子组和低氧+健脾补土血清组中神经元Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表达明显减少,差异均有统计学意义(P0.05);与低氧+神经生长因子组比较,健脾补土组神经元Bcl-2 mRNA及蛋白表达稍升高,Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表达稍减少,差异无明显统计学意义(P0.05);与低氧+健脾补土血清组比较,低氧+健脾补土血清+FAK抑制剂组神经元Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】1.通过整理缺血性中风恢复期的文献,采用数据挖掘之关联分析的方法,揭示缺血性中风恢复期的中医证素分布具有一定的规律,其病位证素主要为脑、心、脾、肾,病性证素主要为气虚、血瘀、痰浊、阴虚。各病位病性相互联系,随着疾病的演变,相互夹杂或转化,其规律更清楚地展现了缺血性中风恢复期的证素特点及病机演变,并发现“脑”与“脾”强关联及“气虚”、“血瘀”、“痰浊”之间演变与“脾”功能相关的特点,从病因病机上为课题组健脾补土方治疗缺血性中风提供了一定的理论及文献支持。2.通过体外神经元低氧/复氧损伤后凋亡模拟脑缺血性再灌注损伤模型,研究健脾补土方对神经元凋亡以及特定基因FAK表达被阻断情况下的Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表达情况,探讨健脾补土组方对体外神经元凋亡的干预机理,其结论如下:A.健脾补土方能减少体外神经元凋亡。B.其作用机制可能通过激活INT-FAK通路,上调FAK的表达,通过Raf/MEK/ERK激酶信号途径,发生进一步级联反应,抑制凋亡相关MEK、Erk2、Bax表达,增加Bcl-2表达,从而达到抑制神经元细胞凋亡,起到保护脑缺血损伤的作用。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R255.2;R285.5
【图文】：
Raf/MEK/ERK信号通路
土方抗神经细胞凋亡实验研究进展组在既往探讨健脾补土方对缺血性中风治疗机制中发现的作用。李花等在探讨健脾补土方对改善脑缺血再灌注大图 8 健脾补土方方解示意图
【参考文献】
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2722452
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