俄色叶总黄酮的分离纯化及抗炎活性研究

发布时间：2020-06-21 05:36

【摘要】：俄色叶中含有大量的黄酮类物质,黄酮类化合物具有抗炎、抗氧化、抗癌及保肝等作用。但目前俄色叶粗提物中黄酮类成分纯度不高,且对于俄色叶总黄酮分离纯化工艺的研究鲜有报道,限制其进一步的开发利用。本课题选用西藏昌都地区的新鲜干燥俄色叶,考察其中黄酮类化合物的分离纯化工艺,并对纯化后的总黄酮进行结构鉴定及抗炎活性研究,旨在为俄色叶的综合利用与开发提供理论依据。本课题利用12种不同极性的大孔吸附树脂对俄色叶总黄酮进行分离纯化,对比12种树脂对俄色叶粗提物中总黄酮的静态吸附、解吸附能力,筛选出吸附率和解吸附率较高的AB-8型大孔树脂。此后,考察AB-8大孔树脂的吸附、解吸附动力学、样液浓度、样液pH、温度、乙醇浓度对其静态吸附、解吸附的影响,得AB-8大孔树脂对俄色叶总黄酮静态吸附、解吸附的最佳工艺:吸附平衡时间为180min,吸附温度为25℃,样液浓度15mg/ml,样液pH 4.0;解吸附平衡时间为180min,乙醇浓度为70%。通过考察上样液流速、上样量、洗脱剂流速、洗脱剂体积、洗脱剂浓度对AB-8型大孔树脂动态吸附、解吸附俄色叶总黄酮的影响,得动态吸附、解吸附的最佳工艺:上样流速2.0BV/h,上样量9BV(144ml),上样液浓度15mg/ml,上样液pH 4.0;洗脱液流速2.0BV/h,6BV 20%乙醇对树脂柱进行洗脱,收集所得馏分中总黄酮含量最高。按最佳工艺纯化所得的俄色叶总黄酮纯度为57.86%,与粗提物中总黄酮含量相比,其纯度是粗提物总黄酮纯度的2.1倍。利用红外吸收光谱对纯化后的俄色叶总黄酮成分初步进行探索,经红外光谱扫描后发现其中含有黄酮类化合物特征吸收峰,验证了所得物含大量黄酮类物质的假设。建立LPS诱导巨噬细胞RAW264.7的体外炎症模型,利用MTT法考察分离纯化后的俄色叶总黄酮对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力的影响,利用Griess法测定诱导后巨噬细胞上清液中NO的含量,运用ELISA试剂盒测定诱导后巨噬细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。研究结果显示,俄色叶总黄酮浓度在50~400μg/ml之间对细胞活力没有影响,且能够在有效的给药浓度下抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型中NO、IL-6、IL-1β和TNF-α的过度产生,并且呈现一定的剂量依赖性,当给药浓度100μg/ml时,俄色叶总黄酮对上述促炎因子的抑制具有显著性差异(P0.05)。以上结果表明,俄色叶总黄酮可能具有一定的体外抗炎活性。
【学位授予单位】：青岛科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285
【图文】：

照片,照片,《中华本草》,四川

叶的简介及研究进展叶的种类、分布及形态叶（Malus toringoides (Rehd.) Hughes leaves），又名泡楸子，ae）苹果属（Malus）花秋苹果组（Section Sorbomalus）陇东海棠is Rehd.）植物的叶子[1]，广泛分布于四川、青海、西藏等地在 3500-3700m、坡度 10°-45°，于湿热条件较好的灌木林、见[2-3]。今，对于俄色植物形态的研究报道，主要见于《中华本草》（物志》及《四川藏药标准》等[4-6]。俄色叶片形态差异较大，长m，，顶部细尖，基部呈宽楔形或近心形，边缘呈圆锯齿状或紧则的深裂，亦有不裂，上面有稀疏的柔毛，下面沿中脉及侧表面常见白色短绒毛，随生长而脱落，老时，叶片颜色则转

黄酮类化合物,基本结构,黄酮

图 1-2 黄酮类化合物基本结构Fig. 1-2 Basic structure of flavonoidsC3）结构的氧化程度和 B 环的连接位置等特点，黄酮和黄酮醇；黄烷酮（又称二氢黄酮）和黄烷酮；异黄烷酮（又称二氢异黄酮）；查耳酮；二氢烷和黄烷醇；黄烷二醇（3，4）（又称白花色苷元物理化性质及功效特征大多为结晶性固体，少数为无定型粉末。黄酮类色团（-OH、-CH3）等的类型、数目及取代位置般来说，黄酮、黄酮醇及其苷类多呈灰黄至黄色而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类等因其结构因而不显色。花色素及其苷元的颜色，则根据 pH<7）、紫（7<8.5）、蓝（PH>8.5）等颜色。黄酮黄酮分子为游离苷元时，可溶于甲醇、乙醇、乙

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