丹参注射液对胎鼠大脑皮质神经干细胞增殖和分化的影响及其机制的研究

发布时间：2020-06-21 05:38

【摘要】：丹参是一味最早记载于《神农本草经》的中草药,目前临床上主要用于防治心脑血管疾病~([1-4])。本文旨在探索丹参注射液对胎鼠大脑皮质神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响及其发生保护作用的相关机制,为丹参可能成为修复受损神经组织结构和功能的潜在药物提供了有效的实验数据。本研究主要内容包括以下几个方面:1.建立细胞培养平台:建立胚胎小鼠大脑皮质神经干细胞(NSCs)的原代培养、扩增、分化以及鉴定等方法,为以下实验提供条件稳定、均一的细胞模型~([5-7])。2.探索丹参注射液对NSCs增殖和分化的影响:将NSCs分为正常对照组(control)和丹参注射液处理组,采用CCK-8试剂、BrdU试剂、CQ1共聚焦高内涵分析系统和RT-PCR技术分别检测丹参注射液对NSCs增殖和分化的影响。实验结果显示,丹参注射液不仅可提高NSCs的增殖能力,同时还可促进其向神经元方向的分化。3.探索丹参注射液对NSCs产生保护作用的相关机制:将NSCs分成3组,即正常对照组(control)、脂多糖(LPS)氧化损伤组和LPS加丹参注射液处理组进行相关机制研究。转录组测序结果显示丹参注射液对LPS氧化损伤后的NSCs产生保护作用与谷胱甘肽代谢、“铁死亡”等密切相关,其作用机制可能与清除自由基和阻断凋亡信号通路相关。实验发现,谷胱甘肽转移酶抑制剂可极大程度抑制丹参注射液对NSCs的保护作用,该结果进一步验证了“丹参注射液对NSCs的保护机制与谷胱甘肽代谢密切相关”的结论。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1 免疫荧光染色鉴定神经干细胞Fig.1 Identification of NSCs by immunofluorescence staining2.3.2 CQ1 高内涵共聚焦系统检测 NSCs 分化细胞比例撤除 bFGF，检测 NSC 自发分化 5 天过程中各类细胞所占百分比变化。结果显示，Nestin 阳性细胞占比迅速下降，24~48h 之间从约 70%下降至不足 10%；而 GFAP、MAP2 和 Oligo2 阳性细胞占比逐渐增加，其中 GFAP 阳性细胞最多，所占比例为 52.7%。NSCs spontaneous differentiation+/DAPI（A）

图 2 NSCs 自发分化后各类细胞占比变化hanges in the proportion of types of cells after NSCs spontaneous differentiation论干细胞是神经系统内未分化的原始细胞，在适宜条件下，可分化成神经胶质细胞和星形胶质细胞等类型。巢蛋白 Nestin 是一种中间丝类型的够特异性的表达在神经上皮干细胞上，为神经干细胞的特征性标志物；蛋白 Map2 是一种磷蛋白质，主要存在于神经元的胞体、树突和树突棘，经元特异性标志物；髓磷酯髓鞘蛋白 PLP 是构成中枢神经系统髓磷脂要膜蛋白之一，可用来标记少突胶质细胞；胶质纤维酸性蛋白 GFAP 主中枢神经系统的星形胶质细胞，广泛用于标记星形胶质细胞。究使用免疫荧光染色方法，通过对 Nestin、MAP2，PLP 和 GFAP 这四蛋白进行分时检测，结果证明了这批用于实验的 NSCs 不仅具有干细胞Hours post without of bFGF（h）

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本文编号：2723605