四妙勇安汤对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及Smad3信号转导通路的影响

发布时间：2020-06-21 13:53

【摘要】：本课题通过建立AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的模型,应用不同浓度的四妙勇安汤干预,观察其对AngⅡ诱导的CFs增殖及TGF-β1/Smad3信号转导通路的影响,探讨四妙勇安汤对CFs增殖的影响及调控机制。分离新生大鼠CFs并进行原代培养及鉴定,应用AngⅡ(10~(-6)mol·L~(-1))建立CFs增殖模型,应用不同浓度四妙勇安汤醇沉药液进行CFs增殖的干预,将传代培养的CFs按实验需求分为A、B、C、D、E五组。即A组:不加入AngⅡ及四妙勇安汤的醇沉药液处理;B组:仅加入AngⅡ处理,但不加四妙勇安汤的醇沉药液;C组:加入AngⅡ处理,并加入含30%四妙勇安汤的醇沉药液进行干预;D组:加入AngⅡ处理,且加入含20%四妙勇安汤的醇沉药液干预;E组:加入AngⅡ处理,和含10%四妙勇安汤的醇沉药液干预。采用MTT比色法检测各组CFs增殖情况,ELISA测各组细胞中TGF-β1表达水平,Western blot法检测Smad3在各组中的活化水平,从而观察四妙勇安汤对AngⅡ诱导的新生大鼠CFs增殖及TGF-β1/Smad3信号转导通路的影响。MTT比色法检测各组CFs存活力:A组OD值为(0.341±0.012),B组OD值为(0.531±0.016),C组OD值为(0.465±0.045),D组OD值为(0.488±0.020),E组OD值为(0.492±0.017)。B与A组比较,OD值明显升高,说明B组CFs活细胞的数量明显增加,即AngⅡ诱导心肌成纤维细胞的增殖造模成功。C组、D组、E组与B组比较,OD值均明显降低,说明含四妙勇安汤各组能降低AngⅡ诱导增殖模型各孔的OD值,即四妙勇安汤各组能降低AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,经单因素方差分析,B组与A组比较,差异具有显著性(P0.05),有统计学意义;C组、D组、E组与B组比较,差异具有显著性(P0.05),亦有统计学意义;C组与E组比较,OD值明显降低,说明C组较E组CFs数量相差明显,经单因素方差分析,两组比较具有显著性差异(P0.05),有统计学意义。ELISA法测各组CFs中TGF-β1表达水平:A组TGF-β1含量为(87.68±3.93)pg/ml,B组TGF-β1含量(122.99±4.86)pg/ml,C组TGF-β1含量(101.72±4.74)pg/ml,D组TGF-β1含量为(108.73±8.28)pg/ml,E组TGF-β1含量(114.33±7.86)pg/ml。B组TGF-β1含量较A组升高,而在E、C、D各组中TGF-β1含量均较B组降低,经单因素方差分析,A组与B组相比较,有统计学意义(P0.05);C组、D组、E组与B组相比较差异均具有显著性,有统计学意义(P0.05);C组较E组和D组TGF-β1含量降低,经单因素方差分析,具有显著性差异(P0.05),有统计学意义,E组和D组相比较,无显著性差异,无统计学意义(P0.05)。Western blot检测Smad3在各组CFs中表达水平:A组Smad3/GAPDH比值为(0.301±0.021),B组Smad3/GAPDH比值为(0.804±0.030),C组Smad3/GAPDH比值为(0.522±0.014),D组Smad3/GAPDH比值为(0.534±0.013),E组Smad3/GAPDH比值为(0.547±0.064)。B组Smad3/GAPDH比值较A组升高,说明B组Smad3表达水平高于A组,即造模成功,C组、D组、E组较B组Smad3/GAPDH比值均降低,说明四妙勇安汤各组能降低Smad3表达,经单因素方差分析,B组与A组相比较,差异具有显著性,有统计学意义(P0.05);C组、D组、E组与B组相比较,差异具有显著性,有统计学意义(P0.05);C组、D组、E组相比较,无统计学意义(P0.05)。综上所述,AngⅡ(10~(-6)mol·L~(-1))可以诱导CFs增殖。在AngⅡ诱导的CFs增殖模型中加入四妙勇安汤药物干预处理后可抑制CFs增殖。本实验中四妙勇安汤抑制CFs增殖情况随设定浓度梯度升高而增强,即30%浓度抑制CFs增殖作用最强,但是否为最佳药效浓度还有待进一步研究。此外证实四妙勇安汤可降低TGF-β1及Smad3的表达,其机制可能通过调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制CFs增殖。
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2724159