“当归类”药材的等级质量和品种鉴定研究

发布时间：2020-06-22 03:14

【摘要】：中药当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根,具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效。当归的商品等级体现了当归的质量优劣,但已知化学成分含量难以有效地评价不同等级当归药材的质量。此外,在国际市场上,中国当归、日本当归(A.acutiloba Kitagava和A.acutiloba Kitagava var.sugiyamae Hikino)、韩国当归(A.gigas Nakai)、欧当归(Levisticum officinale Koch.)和圆当归(A.archangelica L.)(本文将这五种药材统称为“当归类”药材)均存在不同程度的混淆混用情况。为此,本论文对不同等级中国当归之间的化学成分和补血活性进行了比较,研究中国当归等级与化学成分、补血活性之间的相关性;并运用DNA条形码和显微鉴别技术对“当归类”药材进行鉴定和比较;以期为中国当归提供商品等级的划分依据,为“当归类”药材的合理利用提供依据。主要研究内容包括以下三方面:第一,比较了不同大小中国当归的药效成分和补血活性:从甘肃、云南和四川收集了7份中国当归药材,根据单支重量,分为一等(50~70 g)、二等(25~40 g)、三等(10~20 g)、四等(6~9 g)和五等(1~5 g),共计22份样品。采用HPLC法测定了这些样品中藁本内酯、游离阿魏酸和总阿魏酸的含量,用3,5-二硝基水杨酸法测定了多糖的含量;以升高红细胞数为指标,用环孢素A标定补血活性,测定了这些样品的补血活性强度;并运用秩相关分析分别统计不同大小中国当归药材的药效成分含量、补血活性指数与当归等级之间的相关系数。结果表明,在不同等级中国当归中,(1)补血活性由强至弱的顺序为:一等(33.79 U?g~(-1),n=2)、二等(25.98 U?g~(-1),n=6)、三等(23.90 U?g~(-1),n=5)、四等(21.60 U?g~(-1),n=5)、五等(15.38 U?g~(-1),n=4),说明补血活性指数与中国当归大小之间呈显著的正秩和相关,能够评价不同大小当归药材的质量,作为其等级划分的依据;(2)总阿魏酸含量由高到低的顺序为:一等(1.27 mg?g~(-1),n=2)、二等(1.21 mg?g~(-1),n=6)、三等(1.15 mg?g~(-1),n=5)、五等(1.06 mg?g~(-1),n=4)和四等(1.04 mg?g~(-1),n=5),总阿魏酸含量与中国当归大小之间有一定的相关性,但秩相关分析的结果表明两者之间的相关性不强;(3)游离阿魏酸含量由高到低的顺序为一等(0.55 mg?g~(-1),n=2)、三等(0.34 mg?g~(-1),n=5)、二等(0.28 mg?g~(-1),n=6)、五等(0.17 mg?g~(-1),n=4)和四等(0.16 mg?g~(-1),n=5),游离阿魏酸含量与中国当归大小之间具有一定的相关性。但游离阿魏酸的量与当归贮藏时间和加工方法引起成分变化有关,并且只是中国当归中总阿魏酸的小部分,故不宜作为中国当归大小等级划分的依据;(4)多糖含量由高到低的顺序为:四等(85.59 mg?g~(-1),n=5)、五等(81.94 mg?g~(-1),n=4)、二等(75.50mg?g~(-1),n=6)、三等(72.99 mg?g~(-1),n=5)和一等(66.31 mg?g~(-1),n=2),多糖含量与中国当归大小之间有一定负相关性,但秩相关分析的结果表明两者之间的相关性不强;(5)藁本内酯含量由高到低的顺序为:一等(13.05 mg?g~(-1),n=2)、二等(12.91 mg?g~(-1),n=6)、五等(12.36 mg?g~(-1),n=4)、三等(11.05 mg?g~(-1),n=5)和四等(10.80 mg?g~(-1),n=5),藁本内酯含量与中国当归大小之间的相关性不强。第二,运用DNA条形码分子技术鉴定“当归类”药材:分别从中国、日本、韩国、奥地利、波兰和德国等地收集了41份“当归类”药材样品。首次运用ITS1、ITS2、psbA-trnH以及rbcL序列对这些“当归类”药材进行比较和鉴别。药材样品的DNA提取后,分别对上述四个序列进行扩增、测序、拼接、校对,变异位点分析,遗传距离的计算以及Neighbor-Joining(NJ)树的构建等分析。结果表明:(1)中国当归与欧当归在基于ITS1、ITS2和psbA-trnH序列构建的3个NJ树上均聚为一大支,再各自聚为一小支,而rbcL序列基本一致,无变异位点,NJ树无法区分。(2)韩国当归、日本当归和圆当归在四个NJ树上均聚为一大支,再各自聚为一小支。其中,在基于ITS1和ITS2序列NJ树中,日本当归和圆当归分别达到了52%的中度支持率和91%高度支持率。(3)贮藏年限较长的“当归类”药材的ITS1和rbcL序列的提取率分别为82.9%和80.5%,低于ITS2和psbA-trnH序列100%和95.1%的提取率。由此可见,ITS1、ITS2和psbA-trnH序列可以鉴定“当归类”药材,而rbcL不适于“当归类”药材的鉴定;“当归类”药材DNA条形码鉴定的适用性强弱依次为ITS2、psbA-trnH、ITS1。中国当归和欧当归的植物亲缘关系接近,而日本当归和圆当归的植物亲缘关系接近。随着“当归类”药材贮藏时间的延长,DNA逐渐发生降解,较长的ITS序列和rbcL序列在药材中难以保持完整,而相对较短的ITS2和psbA-trnH序列容易完整保存。第三,运用显微技术鉴别“当归类”药材:对34份从中国、日本、韩国、奥地利、波兰和德国等地收集的“当归类”药材样品进行了显微鉴别,并运用显微半定量法测定了淀粉粒常数;结合本课题组前期测定的“当归类”药材多糖含量的数据,研究淀粉粒常数与多糖含量的相关性。结果表明,(1)“当归类”药材的显微特征为纺锤状薄壁细胞、导管、木栓细胞、淀粉粒等。其中,最具有鉴别意义的特征是淀粉粒类型、形态和大小,以及韩国当归沿长轴作不规则方向交错排列的薄壁细胞。(2)“当归类”药材淀粉粒常数的平均值由高到低顺序为:圆当归(2.17×10~9个/mg,n=7),欧当归(1.19×10~9个/mg,n=5),日本当归(9.17×10~8个/mg,n=11),中国当归(1.49×10~3个/mg,n=5)和韩国当归(7.68×10~2个/mg,n=6);(3)“当归类”药材淀粉粒常数与多糖含量的Kendall和Spearman相关系数分别为0.533(P0.01)和0.640(P0.01)。由此可见,根据淀粉粒的性状和数量可鉴别“当归类”药材;这些药材的淀粉粒常数与多糖含量之间具有显著的正秩和相关。此外,还对植物类中药的DNA条形码研究进展进行了综述。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;R282.5
【图文】：

药材,不同等级,样品

不同等级中国当归药材样品

标准曲线,藁本内酯,对照品,标准曲线

藁本内酯对照品标准曲线

【参考文献】