岩白菜素通过激活sirtl通路来促进间充质干细胞向成骨细胞分化

发布时间：2020-06-22 21:59

【摘要】：目的:探索岩白菜素对间充质干细胞成骨分化的影响方法:取人间充质干细胞,分为培养液中加入岩白菜素组和不加入岩白菜素组。均进行成骨诱导分化和成脂诱导分化。用染色及检测成骨和成脂特异性标志物的方法来判断岩白菜素在体内对间充质干细胞的成骨分化及成脂分化的影响。取健康雄性SD大鼠12只。将大鼠随机分成两组:实验组(n=6)和对照组(假手术组n=6)。使用环钻在顶骨中产生4mm的临界尺寸缺陷。实验组用50mg/kg体重的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的岩白菜素进行腹膜内注射,假手术组每周用等量的PBS治疗。手术后8周将大鼠在CO2室中处死。收集颅骨用于放射照相和组织学分析,并评估血清的ALP活性。结果:在使用1-100 μM岩白菜素进行预处理后,与对照组相比,实验组的BMSC中第3天和第5天成骨特异性标志ALP,RUNX2,COL1A1和SIRT1 mRNA水平显着增加(P0.05)。western blot显示实验组的BMSC中第3天和第5天RUNX2,COL1A1和SIRT1的表达水平显著增加,成脂特异性标记物PPARγ蛋白表达减少(P0.05)。茜素红μ染色显示1-100-M岩白菜素处理组中的钙沉积显着增加。油红染色发现岩白菜素处理组中的脂肪滴显着减少使用显微CT分析表明,与手术后8周的假手术组相比,使用岩白菜Bergenin组大鼠的颅骨缺损模型骨形成增加。另外,在Bergenin组的血清中检测到更高水平的ALP活性。结论:实验结果提示岩白菜素可以促进骨髓间充质干细胞BMSC的成骨分化并抑制其成脂分化。对大鼠骨缺损的修复有着显著的促进作用。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

岩白菜素,骨髓间充质干细胞,细胞活性

来测定岩白菜素对ＢＭＳＣ增殖的影响。对增值的作用抑制越明显，说明药物的细胞逡逑毒作用越强。在使用和不使用岩白菜素预处理的组间没有观察到明显的细胞毒性逡逑作用，表明岩白菜素对ＢＭＳＣ的生长没有不良影响（图１）。逡逑ＣＣＫ８逡逑，５．逦州逡逑Ｔ逦□邋０逡逑＾逦□邋０．００１逡逑细邋１＿。－逦ｆ１！邋Ｉ逦□逦００１逡逑ｉ邋ｌｌｌｌｉｉ邋ＩＩｐｉｉ逡逑ＩＳＩ＿邋■■＝二逡逑■邋＿逦■邋■逦□逦１０００逡逑ｏ．ｏ－Ｊ————ＬｂＨ＿ｉＭＬ＿逡逑２４邋ｈ逦７２ｈ逡逑时间逡逑图１岩白菜素对人骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ）细胞活性的影响逡逑如图１，使用ＣＣＫ－８检测岩白菜素对ＢＭＳＣ增殖的影响。实验重复３次进行，数据用逡逑平均值土标准差表示。加入岩白菜素组的结果与不加入岩白菜素组的结果相比没逡逑有明显的细胞毒作用，Ｐ邋＜０．０５。逡逑３．２逦Ｂｅｒｇｅｎｉｎ上调骨特异性标志物的水平逡逑ＡＬＰ活性是ＢＭＳＣ成骨分化的重要标志。在分别使用浓度０．１，１，１０，１００邋ｙＭ的岩逡逑白菜素进行预处理后，检测培养基中ＡＬＰ活性。与对照俎相比（空白对照和阴性对逡逑８逡逑

岩白菜素,骨髓间充质干细胞

逑照），实验组的ＡＬＰ活性在第３天和第５天增加，说明加入岩白菜素后成骨作用得到逡逑了增强（图２Ａ）。逡逑为了评估岩白菜素在ＢＭＳＣ成骨分化中的作用，我们使用了定量ＰＣＲ邋（ｑＰＣＲ）逡逑及蛋白免疫印迹（ＷＢ）的方法检测岩白菜素对成骨特异性基因（包括ＡＬＰ，邋ＲＵＮＸ２逡逑和Ｃ０Ｌ１Ａ１）和蛋白表达的是否有促进作用。ｑＰＣＲ分析显示，与在培养基中不加逡逑入岩白菜素组相比，加入岩白菜素组（浓度为０．０１，０．１，１，１０，１００）的ＢＭＳＣ在第３天逡逑和第５天时，ＡＬＰ，邋ＲＵＮＸ２和ＣＯＬ１Ａ１的ｍＲＮＡ水平显着增加，说明岩白菜素促进逡逑了邋ＢＭＳＣ的成骨分化（Ｐ邋＜０．０５；图２Ｂ）。逡逑蛋白免疫印迹法分析显示，在成骨诱导分化第３天时，与对照组相比，使用浓逡逑度为１０－１００ＨＭ的Ｂｅｒｇｅｎｉｎ处理组可以检测到ＲＵＮＸ２表达量的明显增加。此外，在逡逑将ＢＭＳＣ成骨诱导第５时

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