基于药物代谢途径探究复方黄黛片中君药雄黄的体内命运

发布时间：2020-06-24 19:40

【摘要】：目的:本论文的主要研究目的是基于药物代谢途径,通过研究复方黄黛片中君药雄黄在体内的代谢命运,来揭示含砷制剂中有毒成分三氧化二砷的代谢行为。根据三氧化二砷在体内的代谢行为,找到含砷制剂毒性作用的新机制,为下一步探索解毒机制提供线索。同时,通过对复方黄黛片中单药与雄黄的配伍研究,初步阐释配伍减毒的可能线索,希望为其他含砷复方制剂的研发以及临床安全使用提供有用的实验依据。方法:本论文的研究分三个部分展开。第一部分,为研究无机砷毒性,本实验采用CCK8法检测三氧化二砷对不同细胞系细胞的生长抑制作用。在确证三氧化二砷对白血病细胞的膜毒性以及诱导凋亡作用时,引用流式细胞术检测了白血病细胞的凋亡和活性氧的含量;凋亡相关指标的检测则采用了实时荧光定量PCR、免疫印迹试验(Western blot)技术;同时利用ELISA法检测脂质过氧化物(LPO)、谷胱甘肽(GSH)等膜损伤相关指标。第二部分,为进一步了解无机砷的代谢途径,本实验确定了合适的细胞对象以及给药浓度后,采用实时荧光定量PCR、Western blot以及相关技术检测三氧化二砷、丹参酮ⅡA和靛玉红对CYP450酶系统和As3MT的表达影响;并采用小分子RNA转染细胞的方法进一步解释了三氧化二砷、丹参酮ⅡA和靛玉红对As3MT的表达的影响;同时利用ELISA法检测了As3MT的酶活性。第三部分,为了掌握砷在体内代谢途径的更多证据,在动物体内实验中,采用高效液相联用电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP/MS)技术,通过检测雄黄中可溶性砷的含量以及不同价态来研究砷代谢行为。结果:结果表明,首先三氧化二砷对不同细胞系具有普遍的毒性,虽然其细胞毒性的具体机制还尚不明确,但在其使用的过程中膜毒性以及凋亡诱导的隐患会一直存在。接着在对三氧化二砷代谢研究中发现,I相代谢酶不是影响砷代谢的关键酶,而Ⅱ相代谢酶(As3MT)才是砷代谢的重要和关键酶。最后在动物水平的实验也进一步证实了雄黄能显著诱导As3MT酶活性,雄黄与丹参和青黛的配伍更加强了这一诱导作用,高活性的As3MT能使有毒的三价砷代谢清除加快。总结:纵观全文,本实验研究首次以八种细胞为研究对象,从细胞活力检测着手,确定了合适的细胞对象和给药浓度,并以Ⅱ相代谢酶(As3MT)为关键点,基于代谢的角度去探讨砷在体内的代谢行为。研究发现,一是发现Ⅱ相代谢酶(As3MT)是砷代谢的重要和关键酶,而As3MT可能是砷剂解毒的一个线索。二是配伍的实验结果提示,含砷的复方制剂在配伍使用时,如何达到增效减毒不仅仅只有剂量的考量,体内代谢调控也应时刻关注。基于以上,本实验研究期望含砷制剂在临床安全使用中可以有效规避或减少毒性风险,以及在其他含砷中药的研发中,可以基于代谢的角度,合理配伍以达到增效减毒的目的。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285
【图文】：

图 2 用流式细胞术分析暴露于三氧化二砷 24h 后的 HL-60 细胞的凋亡情况，与对照组比较*P<0.05，***P<0.001。Fig2. Flow cytometric analysis of apoptosis in HL-60 cells exposed to arsenic trioxide for 48 h. (AControl group, (B) 1μM As2O3, (C) 2μM As2O3, (D) 4μM As2O3, (E)8μM As2O3, (F)16μAs2O3,(G) 32μM As2O3.The cells were treated with various concentrations of Arsenic Trioxid(1,2,4,8,16and32μM) for 48 h. The percentages shown in each chart was the percentages apoptotic cells indicated by Q1-UR cells. The line graph (H) are from one representative set of thrindependent experiments. *p < 0.05 , ***p < 0.001 compared with control group.3.3 三氧化二砷对 HL60 细胞内凋亡相关基因 mRNA 与蛋白表达的影响。根据细胞活力数据，确定三氧化二砷浓度（ 1,2,4,8,16,32μM ）处理 HL6细胞后，提取总蛋白与总 RNA，通过 Western-blot 与 qRT-PCR 检测凋亡相关蛋

图 3 凋亡相关蛋白（Bax，Bcl-2）在蛋白和基因 mRNA 水平表达结果。（n=3），与对照组相比，***P < 0.001。Fig3. The chart shows the expression of apoptosis-related proteins and genes .And the graphic ofstatistical results for A: the expression of proteins,B:relative protein level, C and D: the expressionof genes. Apoptosis-related proteins were detected with western blotting utilizing specificantibodies, respectively. Apoptosis-related genes were detected with Real-time PCR System. ***P <0.001 compared with the control group.3.4 三氧化二砷对 HL60 细胞膜脂过氧化和膜通透性的影响为了阐明脂质过氧化和乳酸脱氢酶产物可能参与三氧化二砷诱导的毒性反应，我们进行了脂质过氧化和乳酸脱氢酶渗漏试验。图 4 和图 5 所示的数据分别

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 屈敏;梁华;张涛;崔晓航;;复方黄黛片治疗急性早幼粒细胞白血病疗效分析[J];中华中医药学刊;2018年07期

2 房微;贺洁;李欣;;复方黄黛片配合化疗治疗急性早幼粒细胞白血病32例[J];陕西中医;2011年10期

3 接贵涛;刘平毅;王彦丽;;联合复方黄黛片序贯治疗急性早幼粒细胞白血病临床观察[J];白血病.淋巴瘤;2007年02期

4 向阳,黄世林,郭爱霞,张素芬,王秋娥;复方黄黛片治疗急性早幼粒细胞白血病疗效分析[J];中国实用内科杂志;1999年10期

5 向阳,黄世林,郭爱霞,魏艾红,张励,孙淑君,陈楠楠,成玉斌,王丹;复方黄黛片与化疗交替应用对急性早幼粒细胞白血病患者长期生存的影响[J];临床血液学杂志;2003年05期

6 董菊;张晨妍;许婧娴;王均琴;阮秦莉;吴娟;娄雅楠;;复方黄黛片治疗急性早幼粒细胞白血病的疗效与安全性的系统评价[J];东南大学学报(医学版);2018年06期

7 张晨 ,黄世林,向阳,郭爱霞;复方黄黛片诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究[J];解放军医学杂志;2003年06期

8 谢玮;庞缨;叶絮;冯莹;郭锐;钟乐璇;;复方黄黛片联合沙利度胺治疗难治或复发多发性骨髓瘤临床观察[J];广州医科大学学报;2015年05期

9 王健;黄俊彬;刘祖霖;张碧红;徐宏贵;薛红漫;陈纯;;复方黄黛片与三氧化二砷在45例儿童急性早幼粒细胞白血病中的疗效比较[J];中国实验血液学杂志;2017年06期

10 孙锋;陈楠楠;成玉斌;;复方黄黛片治疗急性早幼粒细胞白血病204例经验总结[J];中西医结合学报;2008年06期

相关会议论文 前6条

1 徐焕华;马增春;高月;;基于药物相互作用的复方黄黛片配伍规律研究[A];2017年（第七届）药物毒理学年会论文集[C];2017年

2 成玉斌;向阳;黄世林;;复方黄黛片对APL患者心电图ST-T和QTC间的影响[A];全国中西医结合血液学学术会议论文汇编[C];2010年

3 向阳;常晓慧;成玉斌;孙淑君;孙峰;李海霞;黄世林;;复方黄黛片为主的缓解后治疗方案对急性早幼粒细胞白血病长期生存的影响[A];全国中西医结合血液学学术会议论文汇编[C];2010年

4 徐懿乔;梁世霞;谢笑龙;刘杰;;复方黄黛片、雄黄与砷酸钠毒性的比较[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年

5 孙淑君;向阳;郭爱霞;;黄世林教授立法“驱邪复正”主治急性早幼粒细胞白血病的临床研究[A];第七届全国中西医结合血液病学术会议论文集[C];2004年

6 王海燕;郭静明;刘红艳;商安芳;;不同砷剂联合化疗治疗初治急性早幼粒细胞白血病的疗效分析[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

相关重要报纸文章 前9条

1 本报记者 陆旅星;让急性早幼粒细胞白血病治疗更“简便”[N];中国医药报;2014年

2 黄世林 向阳 王晓波;中西医结合治疗APL获高度评价[N];中国中医药报;2007年

3 本报记者 操秀英;古老中医药焕发生机要靠现代科技[N];科技日报;2018年

4 记者 孙悦群;省城项目建设年淡季不淡[N];黑龙江经济报;2009年

5 记者冯磊;黄黛片配合化疗治白血病复发率低[N];中国中医药报;2011年

6 记者 孙刚邋通讯员 汪敏;“君臣佐使”配伍治血癌[N];解放日报;2008年

7 记者 施嘉奇邋通讯员 汪敏;从分子水平阐明中药治白血病机理[N];文汇报;2008年

8 记者 柴玉 通讯员 汪敏;用中药复方原理设计联合治疗方案的成功范例[N];中国中医药报;2008年

9 海霞;赤诚奉献 创新不已[N];中国中医药报;2007年

相关博士学位论文 前1条

1 王晓波;复方黄黛片药动学和诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究[D];沈阳药科大学;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 姜腊;基于药物代谢途径探究复方黄黛片中君药雄黄的体内命运[D];安徽医科大学;2019年

2 姚岚;血清药理学方法研究复方黄黛片对K562细胞凋亡的影响[D];大连医科大学;2018年

3 徐焕华;基于药物代谢途径研究复方黄黛片配伍减毒增效[D];广东药科大学;2018年

4 谢淑君;复方黄黛片联合维甲酸诱导治疗急性早幼粒细胞白血病的临床研究[D];广州中医药大学;2017年

5 马玉杰;40例老年急性髓系白血病治疗总结[D];辽宁中医药大学;2011年

6 华芳卉;复方黄黛片联合加味犀角地黄汤治疗热毒阴虚型重再障的临床研究[D];南京中医药大学;2015年

7 焦志真;复方黄黛片在急性早幼粒细胞白血病巩固强化治疗中的临床对照观察[D];广州中医药大学;2012年

8 徐懿乔;复方黄黛片、雄黄的毒性及其抗肿瘤作用研究[D];遵义医学院;2012年

9 杨诗雨;口服砷剂应用于急性早幼粒细胞性白血病维持期治疗的临床观察[D];广州中医药大学;2016年

10 王修平;复方黄黛片应用于急性早幼粒细胞白血病维持期治疗中临床对照观察[D];广州中医药大学;2013年

本文编号：2728270