阳荷降糖、体外抑菌物质基础研究

发布时间：2020-06-25 02:48

【摘要】：阳荷系姜科姜属多年生草本植物Zingiber striolatum Diels,因其食药同源,可直接烹饪食用,含有丰富的膳食纤维、蛋白质、必须氨基酸等,越来越多学者开始研究阳荷,研究发现阳荷具有降血糖、抑菌、治疗痛经等作用,但是相关药效物质基础及其作用机理目前尚不明确。目前阳荷的应用领域还相对较窄,尤其是对其生物活性方面的研究和应用。为了更好的利用阳荷的天然资源,本研究以阳荷为原料,优化了阳荷乙醇提取物、挥发性成分的提取工艺,分析了阳荷挥发性成分的化学组成,对阳荷的乙酸乙酯萃取物进行了简单的分离纯化,对阳荷乙醇提取物及各极性部位的体外抗糖尿病活性进行了筛选,并初步探讨了阳荷乙醇提取物及各极性部位对HepG2细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的作用机制,最后研究了阳荷乙醇提取物及各极性部位的体外抑菌活性。(1)采用正交实验法,以总黄酮的含量为评价指标,以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,考察因素对阳荷总黄酮含量的影响,综合考虑确定了阳荷乙醇提取物制备的最佳制备工艺为70%乙醇,料液比1:12,回流提取2 h。(2)对阳荷挥发性成分的提取工艺进行优化并鉴定阳荷挥发性成分的化学组成,为阳荷的开发利用提试验依据。采用单因素试验、多因素多水平正交试验方法和超声辅助蒸馏法提取法提取阳荷挥发性成分,以阳荷挥发性成分提取率为评价指标,分别研究超声时间、蒸馏时间和料液比对阳荷挥发性成分提取率的影响,以气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectormetry,GC-MS)结合NIST4.0质谱库分析挥发性成分的化学组成及种类,用峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。阳荷挥发性成分的最佳提取工艺是超声60 min、蒸馏时间4 h,料液比1:3 g/ml,提取率达到0.0368%;鉴定出17个主要化学成分,占挥发性成分总量的85.074%,其中烯烃类有8种,含量最高的3个成分是棕榈酸(30.508%),β-水芹烯(12.359%)和芥酸酰胺(7.376%)。(3)阳荷洗净烘干,打粉过60目筛,得到阳荷粉末。70%乙醇,料液比1:12,回流提取2h,得到阳荷乙醇提取物(E001),依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取E001,得到石油醚萃取物(F001)、乙酸乙酯萃取物(F002)、正丁醇萃取物(F003)和水溶物(F004)。用硅胶柱层析结合薄层色谱法分离纯化F002,首次自阳荷中分离鉴定得到主要化学成分胸腺嘧啶核苷。(4)以高浓度葡萄糖培养基为诱导因素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,通过葡萄糖氧化酶法检测阳荷乙醇提取物及各极性部位对胰岛素抵抗细胞模型的葡萄糖消耗量,四唑盐比色试验(MTT)检测细胞存活率。实验结果表明阳荷乙醇提取物具有明显的降糖活性,用蛋白质印迹法(Western blot)分析胰岛素信号通路的蛋白表达的影响:与空白对照组相比,当诱导培养基中葡萄糖浓度为40 mmol/L时吸光度的差值最大,所以选40 mmol/L的葡萄糖培养基来建立胰岛素抵抗细胞模型;阳荷乙醇提取物葡萄糖消耗量明显高于其他极性部位和空白对照组,但低于阳性对照组;细胞存活率基本上可以保持在85%左右,细胞毒性较小;阳荷乙醇提取物对IRS-1、IRβ、P-IRS-1和GLUT2蛋白的表达水平具有一定的增强效果。(5)用滤纸片对乙醇提取物及不同极性萃取物进行抑菌活性测定,有抑菌活性的部位进一步测定其最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。实验结果显示E001、F001、F002、F003、F004对金黄色葡萄球菌效果明显,MIC值在3.125~25 mg/mL之间,MBC值为25 mg/mL,其中石油醚萃取物和乙酸乙酯对金黄色葡萄球菌抑菌活性最优;阳荷乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对枯草芽孢杆菌有较强的抑菌效果,MIC值在3.125~25 mg/mL之间,MBC值为25 mg/mL,其中乙酸乙酯萃取物对枯草芽孢杆菌抑菌活性最优;阳荷乙醇提取物和石油醚萃取物对大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌均有抑菌效果,石油醚萃取物抑菌活性较优;阳荷乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物对苏云金芽孢杆菌没有抑菌作用。
【学位授予单位】：武汉工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284
【图文】：

图 2-1 芦丁标准曲线Fig. 2-1 Rutin standard curve.2.2.4 单因素实验.2.2.4.1 乙醇浓度对阳荷提取物总黄酮含量的考察[40]

图 2-3 料液比对阳荷乙醇提取物总黄酮含量的影响ect of the liquid ratio on the Zingiber striolatum Diels' total f时间对阳荷提取物总黄酮含量的影响示，提取时间的增加影响着阳荷乙醇提取

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本文编号：2728748