基于益气补血法探究当归、黄芪醇提物对4T1乳腺癌小鼠血清及肿瘤组织IL-10和TGF-β1的影响

发布时间：2020-06-26 03:05

【摘要】：目的乳腺癌是目前最常见的女性恶性肿瘤之一,全球发病率正在逐年上升。中医学认为乳腺癌属本虚标实之证,本虚为主,乳腺癌患者普遍存在气血亏虚,故乳腺癌应以扶正固本为总则,施以益气补血法治疗。然而益气补血方药对恶性肿瘤的临床疗效一直存在争议,部分临床医生惧用补益类中药。基于中医扶正固本治则指导和课题组前期研究,本实验拟通过4T1乳腺癌荷瘤小鼠造模后给予当归、黄芪治疗,探讨益气补血法对4T1乳腺癌小鼠血清及肿瘤组织IL-10、TGF-β1的影响。方法选取健康的BALB/c小鼠,通过皮下种植4T1乳腺癌细胞,建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型。将小鼠分为9组:空白对照组(N)、模型组(M)、当归低剂量组(DL)、当归中剂量组(DM)、当归高剂量组(DH)?黄芪低剂量组(HL)、黄芪中剂量组(HM)、黄芪高剂量组(HH)、环磷酰胺组(CTX)。分别依次给予生理盐水(0.2m L)、生理盐水(0.2m L)、低剂量当归(10mg/kg)、中剂量当归(30mg/kg)、高剂量当归(100mg/kg)、低剂量黄芪(30mg/kg)、中剂量黄芪(100mg/kg)、高剂量黄芪(300mg/kg)、CTX(30mg/kg)治疗。造模48h后开始给药,每3天给药1次,空白对照组、模型对照组和中药组采用灌胃给药,CTX组采用腹腔注射给药。每周观察小鼠的精神状态、皮毛光泽度等基本情况,测量并记录体重和肿瘤长短径,运用公式计算肿瘤体积,绘制体重增长曲线和肿瘤生长曲线。造模当天记为第1天,第28天进行眼眶取血,剖取原位瘤、胸腺、肿瘤同侧腋窝下淋巴结、肺脏及脾脏,称重并计算各脏器指数;肉眼观察脏器的质地、大小,并拍照记录;用10%福尔马林固定肺脏48h后,肉眼观察并记录各组的肺转移灶大小,分别记录数目;解剖后将各组的胸腺和肿瘤组织放入10%福尔马林中固定,通过苏木素-伊红(HE)染色,观察当归、黄芪对胸腺组织形态学的影响;目内眦取血后,采用血常规检测和血涂片法,观察当归、黄芪对外周血象和细胞形态的影响;通过ELISA法,分析当归、黄芪对血清及肿瘤组织IL-10和TGF-β1水平的影响;通过免疫组化(IHC)法,分析当归、黄芪对胸腺组织CD3和肿瘤组织IL-10和TGF-β1表达的影响。结果与模型组相比,低剂量当归组显著升高淋巴细胞数LYMPH、嗜酸性粒细胞数EO。中剂量当归组显著升高淋巴细胞数LYMPH、大未染细胞数LCU。显著降低了嗜碱性粒细胞数BASO、嗜碱性粒细胞百分比BASO%、平均红细胞血红蛋白MCH、血红蛋白分布宽度CHDW。与模型组相比,低剂量黄芪组显著降低嗜碱性粒细胞百分比BASO%、平均红细胞血红蛋白量MCH、血红蛋白分布宽度HDW。中剂量黄芪组显著降低嗜碱性粒细胞百分比BASO%、血红蛋白分布宽度HDW;高剂量黄芪组显著降低单核细胞数MONO、单核细胞百分比MONO%、嗜碱性粒细胞数BASO、嗜碱性粒细胞百分比BASO%、平均红细胞体积MCV。与正常组相比,模型组小鼠的胸腺重量、胸腺指数明显下降。与模型组相比,高剂量当归组胸腺重量、胸腺指数显著升高,并接近正常组。低剂量黄芪组和高剂量黄芪组胸腺重量明显增加,胸腺指数显著升高。与正常组相比,模型组小鼠的肺、脾、淋巴结重量明显增加,肺、脾、淋巴结指数明显升高。与模型组相比,低剂量当归组淋巴结、肺重量明显增加,淋巴结、肺指数显著升高。中剂量当归组肺指数明显升高。中剂量黄芪组(P0.05)肺指数较模型组明显升高。模型组小鼠普遍发生肺转移。与模型组相比,低剂量当归组、中剂量当归组、高剂量当归组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组的肺大转移灶数明显下降。低剂量黄芪组和高剂量黄芪组的肺总转移灶数和肺转移率也明显下降。正常组小鼠的胸腺组织,淋巴细胞结构清晰,轮廓清楚,分布均匀;模型组小鼠的胸腺组织,淋巴细胞形态、大小不一,量少而稀疏;CTX组小鼠的胸腺组织,淋巴细胞大小不一,排列紊乱,细胞核形态各异;当归和黄芪组胸腺组织淋巴细胞有不同程度的改善。与正常组相比,模型组CD3阳性表达显著降低。CTX组CD3阳性表达较模型组增多。与模型组相比,低、中、高剂量当归组和低、中、高剂量黄芪组胸腺的CD3阳性表达均有不同程度的增加。模型组血清IL-10水平与正常组相比显著升高。中、高剂量黄芪组和CTX组小鼠血清IL-10水平均显著低于模型组。模型组血清TGF-β1水平与正常组相比显著升高。与模型组相比,低、中剂量当归组小鼠血清TGF-β1水平显著降低;低、中剂量黄芪组小鼠血清TGF-β1水平显著降低;CTX组小鼠血清TGF-β1水平显著降低。乳腺癌肿瘤组织IL-10和TGF-β1表达阳性,模型组肿瘤组织呈现IL-10高表达。CTX组肿瘤的IL-10阳性表达较模型组明显降低。与模型组相比,低、中、高剂量当归组和低、中、高剂量黄芪组肿瘤的IL-10阳性表达均有减少。其中,各剂量黄芪组减少更明显。模型组肿瘤组织呈现TGF-β1高表达。CTX组肿瘤的TGF-β1阳性表达较模型组明显降低。与模型组相比,各剂量当归组和黄芪组肿瘤的TGF-β1阳性表达均减少。结论1.当归、黄芪能改善4T1乳腺癌小鼠外周血淋巴细胞和嗜碱性粒细胞异常,改善胸腺结构,增加胸腺重量和指数,减少肺转移,具有一定的抗乳腺癌作用。2.IL-10和TGF-β1可能是当归、黄芪改善4T1乳腺癌小鼠外周血象、降低肺转移的作用机制之一。
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

黄芪,乳腺癌,当归,小鼠

图 5 当归、黄芪对 4T1 乳腺癌小鼠肺、脾和肿瘤重量的影响注：与正常组比较，#P<0.05,##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05,**P<0.010200400600800100012001400N M DL DM DH HL HM HH CTX量（重gm）肺重量脾重量肿瘤重量##*****##

小鼠,核形,荷瘤小鼠,嗜酸性粒细胞

尘样的紫红色颗粒，胞核大，核形不规则，呈肾形、马蹄形等，常折叠弯曲，淡紫红色，染色质细致、疏松如网状。由图9可见，乳腺癌荷瘤小鼠的中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞增多

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