【摘要】：目的:基于核磁共振(~1H-NMR)代谢组学技术,结合生化指标分析,研究交泰丸对失眠模型大鼠的干预作用,探讨交泰丸干预失眠的作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和交泰丸组。交泰丸组灌胃交泰丸水提液,每天1次,连续5天,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水。实验第3天,模型组和交泰丸组一次性腹腔注射PCPA甲酯盐酸盐(564 mg·kg-1,相当于PCPA 450mg·kg-1)建立失眠模型,正常组一次性腹腔注射等体积生理盐水。实验期间观察大鼠自发活动变化。基于~1H-NMR代谢组学技术测定尿液样本、血清样本和海马组织的代谢物图谱,对代谢物图谱进行正交偏最小二乘判别分析(Orthogonal Partial Least-Squares Discriminant Analysis,OPLS-DA),运用变量重要性投影(Variable Importance in the Projection,VIP)和t检验筛选出组间具有显著差异的代谢物。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠下丘脑、海马、前额叶皮质和血清中神经保护因子如脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)水平,凋亡相关因子如B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax),神经递质如谷氨酸(Glu)、胆囊收缩素8(CCK-8)水平,细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-6和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)水平,并采用考马斯亮蓝法(Bradford法)测定组织样品蛋白含量。结果:1.交泰丸能明显抑制失眠大鼠自发活动。2.(1)与正常组相比,模型组大鼠尿液中N-乙酰糖蛋白、丙酮、丙酮酸、琥珀酸、α-酮戊二酸、二甲胺水平显著降低(P0.05),二甲基甘氨酸、牛磺酸、苯乙酰甘氨酸水平显著升高(P0.05),与模型组比较,交泰丸组大鼠尿液中N-乙酰糖蛋白、丙酮酸、琥珀酸、α-酮戊二酸、二甲胺水平显著升高(P0.05),二甲基甘氨酸、牛磺酸、苯乙酰甘氨酸水平显著降低(P0.05);(2)与正常组相比,模型组大鼠血清中LDL/VLDL、不饱和脂肪酸、异亮氨酸、N-乙酰糖蛋白、谷氨酸、O-乙酰糖蛋白、胆碱、磷酸胆碱、氧化三甲胺水平显著升高(P0.05),与模型组比较,交泰丸大鼠血清中LDL/VLDL、异亮氨酸、N-乙酰糖蛋白、谷氨酸、胆碱、磷酸胆碱水平显著降低(P0.05);(3)与正常组比较,模型组大鼠海马中丙氨酸、γ-氨基丁酸、肌醇水平显著降低(P0.05),N-乙酰天冬氨酸、肌酸/磷酸肌酸、甘油磷酸胆碱、牛磺酸水平显著升高(P0.05),与模型组比较,交泰丸大鼠丙氨酸、γ-氨基丁酸、肌醇水平显著升高(P0.05),甘油磷酸胆碱、牛磺酸水平显著降低(P0.05)。3.与正常组比较,模型组大鼠下丘脑、海马、前额叶皮质和血清中IL-2、IL-6、BDNF、NGF、CCK-8水平显著降低(P0.05),下丘脑、海马、前额叶皮质和血清中GFAP、Glu水平显著升高(P0.05),下丘脑、海马和前额叶皮质中的Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.05),血清中Bcl-2/Bax比值没有显著差异;与模型组比较,交泰丸组大鼠下丘脑、海马、前额叶皮质和血清中IL-2、IL-6、BDNF、NGF、CCK-8水平显著升高(P0.05),下丘脑、海马、前额叶皮质和血清中GFAP、Glu水平显著降低(P0.05),同时交泰丸组大鼠下丘脑、海马和前额叶皮质中的Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.05),但血清中Bcl-2/Bax比值没有明显改变。结论:1.交泰丸能明显抑制失眠大鼠自发活动。2.交泰丸干预失眠的机制可能与调节机体脂质代谢、能量代谢、氨基酸代谢、胆碱代谢和肠道菌群代谢有关。3.交泰丸干预失眠的机制可能与调节神经保护因子BDNF、NGF,凋亡相关因子Bcl-2、Bax,神经递质Glu、CCK-8和细胞因子IL-2、IL-6水平,抑制星形胶质细胞增生活化有关。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：
10图 2-1 实验技术路线图Fig 2-1 Schematic representation of experiment2.3 大鼠的自发活动实验实验开始前将大鼠置于干净的饲养笼中提前适应 3 min，记录各组大鼠 2 min 内自主活动时间和前肢离地举立次数作为正常活动反应指标。末次给药后 1 h 再次测量各组大鼠上述指标[59]。
图 2-2 交泰丸对大鼠自发活动的影响（ ±s, n=6）与模型组比较，*P<0.05。Fig 2-2 Effect of Jiao-Tai-Wan on the locomotor activity of rats ( ±s, n=6)*P<0.05 compared with the model group.3.2 大鼠的尿液样本1H-NMR 代谢物图谱分析3.2.1 尿液样本1H-NMR 代谢物图谱
【参考文献】
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2730263
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