茵栀黄中药成分葡萄糖醛酸代谢筛选及其细胞毒性效应

发布时间：2020-06-26 12:16

【摘要】：茵栀黄复方包含复杂的天然中药成分,这些成分多数具有消炎、抗氧化、抗菌以及抗癌等药理作用,但作用机理尚不明确;同时,许多中药成分如黄酮类化合物,它们在体内极低的生物利用度是导致其无法被有效应用的主要原因,其中尤以酚羟基的葡萄糖醛酸化Ⅱ相代谢引起的首过效应最为常见。因此深入研究不同类型的多酚类中药成分的代谢机理,或对其结构类似物的构效关系进行探索性研究,将为寻找安全有效、低廉的抗肿瘤中药提供帮助。本文主要研究内容包括:1)以茵栀黄注射液中6种主要的黄酮结构类似成分大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、绿原酸、栀子苷、阿魏酸为底物,通过体外葡萄糖醛酸化代谢实验,考察了在不同类型羟基上发生葡萄糖醛酸化的代谢特点,发现大黄素及其相关衍生物的主要葡萄糖醛酸结合位点发生在3号位。2)以茵桅黄注射液中4组主要的黄酮苷类化合物及其苷元为底物,即槲皮素-金丝桃苷-芦丁、木犀草素-木犀草苷、黄岑素-黄岑苷、汉黄岑素-汉黄岑苷,建立了一种通过HPLC-UV与LC-MS/MS图谱共同确证代谢产物的分析方法,并讨论黄酮类物质的葡萄糖醛酸结合的空间立体选择性。实验发现,B环上没有羟基的黄酮苷类化合物汉黄芩苷及黄芩苷均不容易发生葡萄糖醛酸化代谢作用,但是容易酶解成相应苷元物质。B环上有羟基的黄酮苷类化合物可以结合一个或两个葡萄糖醛酸苷如金丝桃苷、芦丁和木犀草苷,同时这类物质也容易发生部分酶解,生成其相应苷元。3)通过CCK-8实验,检测茵桅黄有效成分及其葡萄糖醛酸代谢物对宫颈癌细胞的毒性效应。15种茵栀黄单体中,槲皮素、木犀草素、黄岑素、汉黄岑素、大黄素和大黄素甲醚对体外培养的HeLa细胞增殖有抑制作用。其中大黄素对细胞增殖的抑制率呈量效关系,最大抑制率达62.9%;大黄素甲醚浓度大于10 μM后,随着作用时间的增加,对细胞抑制几乎达到100%,发生葡萄糖醛酸化代谢后对细胞的作用几乎消失。酚酸类物质阿魏酸代谢后对细胞抑制作用明显。综合中药单体及其代谢后对细胞的毒性效应,预测大黄素和阿魏酸在成为治疗宫颈癌细胞的候选化合物中的潜力最大。
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285
【图文】：

黄酮类物质,注射液,化学结构式

结构中的碳原子，结合一个或多个葡萄糖醛酸苷分子，发生３＾（２亲核取代反应，逡逑形成比原底物极性更大的葡萄糖醛酸苷化合物。本实验中选定茵栀黄注射液中六逡逑种有效成分如图２－１，探究其体外葡萄糖醛酸代谢产物及其反应表型。逡逑１０逡逑

大黄素,大黄酚,葡萄糖醛酸化,色谱图

ＵＤＰＧＡ邋（ｍＭ）逦Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｔｉｍｅ邋（ｍｉｎ）逡逑图２－２体外孵育条件考察：Ａ为ＨＬＭ浓度考察；Ｂ为孵育体系ｐＨ考察；逡逑Ｃ为辅酶ＵＤＰＧＡ浓度考察；Ｄ为大黄素孵育时间考察逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ邋ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ｖｉｔｒｏ：邋Ａ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ＨＬＭ；邋Ｂ邋ｉｓ邋ｔｈｅ逡逑ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ｐＨ；邋Ｃ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ＵＤＰＧＡ；邋Ｄ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｔｉｍｅ邋ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ｅｍｏｄｉｎ逡逑以大黄素代谢为例，实验孵育条件的优化结果如图２－２。Ａ图中随着ＨＬＭ逡逑浓度的增加，反应速率及产物的量均有所增加，然而在后续实验中０．５邋ｍｇ／ｍＬ的逡逑ＨＬＭ也能满足实验需求，考虑其反应成本，最终孵育体系中采用ＨＬＭ浓度为逡逑０．５邋ｍｇ／ｍＬ。Ｂ图中酸性及碱性条件下，酶的活性均受到一定的影响，因此选用逡逑与人体环境相同的ｐＨ＝７．４０Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液。Ｃ图中当ＵＤＰＧＡ的浓度较小时，逡逑反应速率很低，产物生成少，随着浓度的增加，产物增多，当增加到５邋ｍＭ时，逡逑相对反应率增加缓慢，考虑实验成本，选用ＵＤＰＧＡ终浓度为２邋ｍＭ做反应。通逡逑过对不同底物的反应时间与浓度做考察

【参考文献】