荆防散正丁醇部位抗炎作用的NF-κB信号通路机制研究

发布时间：2020-06-26 13:34

【摘要】：目的:观察荆防散正丁醇部位对气管滴注LPS所致小鼠急性肺损伤(ALI)模型及LPS刺激诱导的RAW264.7细胞炎症模型的保护作用,探讨其抗炎效应的NF-κB信号通路机制,并初步探究该部位抗炎主要物质基础,以补充、完善该部位的抗炎作用研究,为其临床应用提供药理学依据。方法:(1)荆防散正丁醇部位主要化学成分测定:采用高效液相色谱法(HPLC)对荆防散正丁醇部位的升麻素苷、橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基维斯阿米醇苷成分含量进行测定;(2)荆防散正丁醇部位抗炎作用研究:○1以醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高急性炎症模型为载体,验证荆防散正丁醇部位抗炎效应;○2以气管滴注LPS所致小鼠ALI模型为载体,观察药物对ALI小鼠肺湿干重比值(W/D)、肺指数、肺组织MPO活性、肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白含量及肺组织病理形态学的影响。(3)荆防散正丁醇部位抗炎作用机制研究:○1整体动物水平:ELISA法测定ALI小鼠BALF中炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α及趋化因子MIP-1α、MIP-1γ含量;Real-Time PCR法测定药物对ALI小鼠肺组织NF-κB p65、NF-κB p50、IκBα及VEGFa m RNA表达水平的影响;Western-Blot法测定药物对ALI小鼠肺组织NF-κB p50蛋白表达水平的影响。○2细胞水平:ELISA法测定经LPS刺激后的RAW264.7细胞上清IL-6、TNF-α含量,Griess法测定细胞上清NO含量;Real-Time PCR法测定药物对RAW264.7细胞模型NF-κB p65、NF-κB p50和IκBαm RNA表达水平的影响。(4)荆防散正丁醇部位抗炎作用有效成分研究:以LPS刺激诱导的RAW264.7细胞炎症模型为载体,测定升麻素苷、橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基维斯阿米醇苷对细胞上清IL-6、TNF-α、NO含量的影响;Real-Time PCR法测定橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基维斯阿米醇苷对模型细胞NF-κB p65、NF-κB p50和IκBαm RNA表达水平的影响。结果:(1)本实验所用荆防散正丁醇部位含升麻素苷496.08μg/g生药、橙皮苷302.02μg/g生药、5-O-甲基维斯阿米醇苷271.13μg/g生药、迷迭香酸67.70μg/g生药。(2)荆防散正丁醇部位能不同程度降低LPS气管滴注所致ALI小鼠BALF中总蛋白含量、肺W/D、肺指数、肺组织MPO活性,改善ALI小鼠肺组织炎症病变程度。(3)荆防散正丁醇部位能不同程度地降低ALI小鼠肺组织BALF中细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α及趋化因子MIP-1α、MIP-1γ水平;明显下调肺组织NF-κB p65、NF-κB p50 m RNA和NF-κB p50蛋白的表达水平。荆防散正丁醇部位能降低经LPS刺激后RAW264.7细胞上清IL-6、TNF-α、NO含量,下调细胞NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαm RNA表达水平。(4)对LPS刺激诱导的RAW264.7细胞炎症模型,橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基维斯阿米醇苷能减少细胞上清IL-6含量,5-O-甲基维斯阿米醇苷能降低NO含量。5-O-甲基维斯阿米醇苷、橙皮苷均明显下调细胞NF-κB p50 m RNA表达水平,迷迭香酸明显下调细胞NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαm RNA表达水平。结论:荆防散正丁醇部位体内、体外分别对LPS所致ALI小鼠模型或RAW264.7细胞炎症模型具有良好抗炎作用,作用发挥与下调NF-κB p65、NF-κB p50、IκBα基因和NF-κB p50蛋白表达,从而减少炎性介质IL-6、IL-1β、TNF-α、MIP-1α、MIP-1γ和NO的释放有关。橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基维斯阿米醇苷可能是荆防散正丁醇部位发挥抗炎效应的主要物质基础之一。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

示意图,制备流程,萃取液,示意图

成都中医药大学 2014 级硕士学位论文2 方法与结果2.1 荆防散正丁醇部位的制备取荆芥、防风各 250g，加 2L 水浸泡 30min，煎煮 1h，将药液过滤，然后将药渣加 1.5L 水，煎煮 2 次，每次 30min，过滤，合并 3 次滤液，减压浓缩至约300ml 的浓缩液，用石油醚萃取至萃取液近无色，再将水层用乙酸乙酯萃取至萃取液近无色，最后将水层用正丁醇萃取至萃取液近无色，将正丁醇层液减压浓缩至浸膏，即得荆防散正丁醇部位，出膏率为 3.12%。荆防散正丁醇部位制备流程示意图见图 1。

含量测定,图谱,对照品

四种对照品含量测定图谱

【参考文献】