群海绵MNP-2015及其共附生真菌的次级代谢产物研究

发布时间：2020-06-27 00:33

【摘要】：海洋特殊的环境使其成为了天然产物的重要宝库。海绵作为地球上最古老的无脊椎动物,不仅种类繁多,而且分布广泛,是海洋生物重要的组成部分。海绵体内体表附着着包括真菌在内的大量微生物,这些共附生微生物具有丰富的生物多样性和化学多样性,是天然先导药物的重要来源之一。本论文以群海绵MNP-2015及其共附生真菌为研究对象,系统开展了其次级代谢产物及其体外生物活性研究。群海绵MNP-2015用甲醇浸提,并用乙酸乙酯萃取后获得粗提物Ⅰ。从该海绵中分离得到5株共附生真菌(L1-2、L2-1、L4、L8-1和L14),通过抗菌活性筛选,得到一株活性较好的菌株L14;结合形态学和分子生物学鉴定结果,确定菌L14为曲霉(Aspergillus sp.),GeneBank Accession编号为MF093522。通过扩大培养和萃取,获得菌L14发酵液粗提物Ⅱ。以活性追踪为导向,采用现代色谱技术(pre-HPLC、semiprep-HPLC等),对粗提物Ⅰ和Ⅱ进行系统分离,共得到了 9个单体化合物(1-9),其中粗提物Ⅰ来源有5个(1-5),粗提物Ⅱ来源有4个(6-9)。运用现代波谱技术(NMR、MS等)和文献对照,共鉴定了 7 个化合物,分别为 4-bromo-1H-pyrrole-2-carboxamide(1)、4-bromo-1H-pyrrole-3-carboxamide(2)和 5-bromo-N-(methox-ymethyl)-1H-pyrrole-2-carboxamide(3)、methyl 2-(4-hydroxyphenyl)acetate(6)、methyl 2-(2,5-dihydroxyphenyl)acetate(7)、dibutyl phthalate(8)和bis(6-methylheptyl)phthalate(9)。体外抗菌研究结果表明,化合物1-9体外抑制白色念珠菌(CandidaalbicansAY 204006)、大肠杆菌(Escherichia coli AB 94012)和金黄色葡萄球菌(StaphyloccocusaureusAB2010021)能力都较弱,MIC值不低于100μg/mL。
【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284
【图文】：

抑菌实验,粗提物,正置

素Ｂ邋ＧＯＯｐｇ／ｍＬ）作为阳性对照，每组实验做３３０°Ｃ正置培养４８邋ｈ后，观察结果。逡逑性实验逡逑备方法同上。上层用培养好的细菌菌液代替真菌菌阴性对照，等体积的氨苄青霉素钠溶液（２００邋Ｍｇ／ｍ次平行实验。３ＣＴＣ正置于恒温培养箱中，培养２４邋ｈ，果表明，粗提物Ｉ的抗菌活性既好又广（图２－１、较明显的抑菌效果，尤其是对金黄色葡萄球菌，ｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ时都具有较好的抑制作用，抑菌２２ｍｍ。对于大肠杆菌和白色念珠菌，在样品浓抑菌圈直径分别达１３ｍｍ、２０ｍｍ与１５ｍｍ、２１ｍ

谱图,粗提物,谱图,海绵

ＭＲ谱图可以看出，群海绵粗提物Ｉ化合物较为丰富，点，本课题选用该群海绵粗提物Ｉ开展后续的天然产新颖、活性较好的天然产物。逡逑物的分离逡逑的预分离逡逑甲醇完全溶解，浓度约为３００邋ｍｇ／ｍＬ，再将溶液用孔径进行滤过后，制备得到澄清的溶液。采用ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ制备高效液相色谱柱（ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉ－ＮＸ，５0ｘ动相，将粗提物Ｉ分为Ｆｉ－Ｆｆｔ共６段组分，再分别进），并对６段物质进行抑菌活性追踪，最后根据抑菌活

【参考文献】