何首乌九蒸九晒炮制工艺与质量标准研究

发布时间：2020-06-27 21:46

【摘要】：目的:采用HPLC法探究何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)九蒸九晒炮制过程中指标性成分二苯乙烯苷、游离蒽醌和结合蒽醌含量的变化规律;同时对影响何首乌炮制品质量的因素进行考察,采用正交试验优化何首乌九蒸九晒炮制工艺,为何首乌的炮制提供新的工艺参数;在优化工艺的基础上对何首乌进行质量方面的考察研究,拟定相应的质量标准草案,以更好地揭示何首乌九蒸九晒炮制的内涵。最后采用细胞实验对何首乌各炮制品的肝细胞活性做初步研究,探究何首乌九蒸九晒的合理性,为何首乌炮制减毒和临床用药安全性提供实验依据。方法:1.经典与现代两种炮制方法指标性成分含量变化规律的研究结合文献,采用HPLC法测定何首乌九蒸九晒炮制品中指标性成分的含量,并与药典法何首乌比较,分析其变化规律。2.九蒸九晒炮制工艺的研究确定因素和水平,以指标性成分的含量为考察指标,采用正交试验,优选何首乌最佳炮制工艺。3.质量标准研究依照2015版《中国药典》的检测方法,对不同批次的何首乌炮制品的性状、显微、薄层、水分、总灰分、浸出物和指标性成分的含量进行考察,对其质量进行初步评价。最后,依据实验结果,拟定何首乌九蒸九晒质量标准草案。4.何首乌各炮制品对肝细胞活性作用的研究采用CCK-8法测定九蒸九晒何首乌及正交实验各炮制品对正常人L02肝细胞的抑制率的影响,探究何首乌九蒸九晒的合理性。结果:1.经典与现代两种炮制方法指标性成分含量变化规律的研究九蒸九晒炮制品中,二苯乙烯苷的含量随蒸晒次数的增加呈明显下降趋势,结合蒽醌和总蒽醌含量整体呈下降趋势,游离蒽醌的含量逐渐增加。药典法何首乌各成分的含量与九蒸九晒品中的四蒸四晒品接近。2.九蒸九晒炮制工艺的优化通过前期实验,确定蒸制时间(A)、晒制时间(B)和蒸晒次数(C)三个因素,并分别设置三水平,以二苯乙烯苷、游离蒽醌及结合蒽醌含量为考察指标进行正交试验。结果显示A_3B_1C_3为何首乌最佳炮制工艺,即蒸制4 h、晒制4 h、蒸晒11次。其中,影响何首乌九蒸九晒炮制工艺因素的主次顺序为:ACB,即蒸制时间蒸晒次数晒制时间。3.何首乌九蒸九晒质量标准草案的拟定对14个批次的何首乌进行外观性状、水分、显微、薄层、总灰分、浸出物及指标性成分含量的检测,评价何首乌炮制品的质量。其中,水分的平均值是13.51%,范围9.15~16.35%;总灰分的平均值是2.75%,范围2.12~4.98%;浸出物含量的平均值是5.07%,范围0.77~10.39%;二苯乙烯苷含量的平均值是1.43%,范围0.49~3.12%;游离蒽醌含量的平均值是0.295%,范围0.147~0.611%;结合蒽醌含量的平均值是0.009%,范围0.001~0.024%。最终,何首乌九蒸九晒质量标准草案确立。4.何首乌各炮制品对肝细胞活性作用的研究炮制程度越深,何首乌对肝细胞的抑制率越弱。结论:1.经典与现代两种炮制方法指标性成分含量变化规律的研究炮制对指标性成分含量产生影响,可能与何首乌炮制减毒作用相关。2.优化何首乌九蒸九晒的炮制工艺拟定炮制工艺参数为“蒸制4h、晒制4h、蒸晒11次”,在提升产品质量的同时,为大规模生产提供了实验依据。3.拟定的何首乌质量标准应符合性状、显微及薄层鉴别的要求,二苯乙烯苷含量不得少于0.40%,游离蒽醌含量不得少于0.100%,结合蒽醌的含量不得高于0.020%。4.何首乌各炮制品对肝细胞活性作用的研究细胞抑制率与炮制程度呈现一定的相关性,何首乌九蒸九晒具有一定的合理性。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R283
【图文】：

色谱图,何首乌,大黄素甲醚,制首乌

素、大黄素甲醚混合对照品；B. 何首乌及各炮制品游离蒽醌含量叠加图；C. 何测叠加图 1. 大黄素；2.大黄素甲醚；S1-S9. 一蒸一晒品至九蒸九晒品；S10. 药S11. 何首乌生品图 2 （制）何首乌蒽醌类含量测定 HPLC 色谱图第二节正交试验水平的确定文献查阅及前期对何首乌九蒸九晒主要化学成分变化规律的制时间、晒制时间及炮制次数对其主要成分含量变化有较大素进行考察。对于水平的确定，蒸制时间多参考古代文献。豆半碗煮熟去豆”、“用竹刀刮去黑皮，米泔浸二日，切片，每豆三斗，每次用三升三合三勺，以水浸过甑内，铺豆一层药一锅上蒸之，豆熟为度。去豆用，九蒸九晒为佳。”、“米泔水浸皮，切片，黑豆五升同首乌滚水浸一时，蒸熟去豆”、“水浸一

何首乌,外观,皱缩,小块

湖北 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕色气香微湖北野生 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕色气香微贵州 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕色气香微贵州 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕褐色气香微云南 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕色气香微云南 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕红色气香微湖南 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕褐色气香微湖南 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕褐色气香微广东 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕褐色气香微高桥药材市场 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕褐色气香微高桥药材市场 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕色气香微高桥药材市场 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬黑褐色气香微高桥药材市场 1 cm3见方的皱缩小块黑色坚硬棕褐色气香微

【参考文献】