龙血竭固体分散体与包合物的制备、表征及对原发性高血压食蟹猴的影响

发布时间：2020-06-28 11:19

【摘要】：【目的】龙血竭是传统的名贵中药和壮药,研究证明具有多种药理活性,但其溶解度低,限制了其临床应用。本项目旨在提高龙血竭(Chinese dragon's blood,CDB)中多成分的溶解度,以期提高CDB中多组分的生物利用度,最后考察CDB提高溶解度前后,对原发性高血压食蟹猴血压及有关血液生化指标的影响。本项目为中药的难溶性成分群的改性释放,为CDB的二次开发(包括新用途),提供研究基础,具有重要的研究价值和意义。【方法】1.首先,以β-环糊精(β-CD)、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)以及聚乙烯吡咯烷酮k30(PVP_(k30))为载体材料,采用溶剂法制备龙血竭β-CD包合物(CDB-βCD)、龙血竭HP-β-CD包合物(CDB-HP)和龙血竭PVP_(k30)固体分散体(CDB-PVP)。接着,采用HPLC法测定CDB中指标成分龙血素B的含量,测定CDB包合物以及CDB-PVP的溶解度、体外溶出度,绘制溶出曲线;采用傅立叶红外光谱法、差示扫描量热法和X射线衍射法进行结构表征。2.采用NaNO_2-Al(NO_3)_3-NaOH比色法测定龙血竭中总黄酮的含量及在不同溶剂条件下总黄酮的溶解度;在模拟人工胃液条件下(p H=1.2)测定CDB-βCD、CDB-HP和CDB-PVP各比例下总黄酮的溶解度。3.筛选原发性高血压食蟹猴20只,随机分为CDB高剂量组(是低剂量组的4倍,为0.72g/kg)、CDB低剂量组(按照人体重折算成猕猴的剂量,为0.18g/kg)、CDB-PVP组(含CDB与CDB低剂量组相当,为1.39g/kg)、阳性对照组(卡托普利,按照人体重折算成猕猴的剂量,为7.52mg/kg)、模型组,并以正常血压的食蟹猴为空白对照组,每组4只,除空白组和模型组外,灌胃给予相应药物,每d灌胃1次,每周6d,休息1d,为1个疗程,共4个疗程。隔天测量血压。给药前以及每个疗程灌胃给药的最后一天,空腹取静脉血检查检查血常规、肝肾功能、凝血四项。【结果】1.制备CDB-βCD、CDB-HP和CDB-PVP后,龙血素B的溶解度及体外溶出度均比原料有显著增加。(1)溶解度测定实验中,以CDB中龙血素B为溶解度评价指标,CDB原料及物理混合物未检出龙血素B,溶解度为0;CDB-βCD(1:6、1:12、1:18,w/w)平衡溶解度分别为11.16μg/ml、16.28μg/ml、22.07μg/ml;CDB-HP(1:6、1:12、1:18,w/w)平衡溶解度分别为34.53μg/ml、57.74μg/ml、58.03μg/ml;CDB-PVP(1:2、1:4、1:6.5、1:9,w/w)平衡溶解度分别为0.51μg/ml、38.34μg/ml、95.34μg/ml、101.29μg/ml。(2)溶出速度测定实验中,CDB-βCD(1:6、1:12、1:18,w/w)均未检测出龙血素B,溶出度为0;CDB-HP(1:6、1:12、1:18,w/w)在5min、10min中累积溶出百分率分别为2.2%、7.5%、11.7%和6.9%、15.3%、25.2%,在120min时累积溶出百分率分别为73.1%,75.4%,88.9%,与CDB原料相比均具有显著性差异(P0.01),且溶出度及溶出速率随着HP-β-CD用量的增加而提高(1:6、1:12、1:18组间t检验,P均0.05);CDB-PVP中龙血素B的溶出度以及溶出速度,也有很大的提升,CDB-PVP(1:9)在第5min和10min的累计溶出度分别为4.3%和14.6%,与CDB原料相比具有显著性差异(P0.01),1:6.5和1:9的固体分散体在120min时龙血素B的累积溶出百分率已高达73%,溶出百分率与PVP用量成正比(1:6、1:12、1:18组间t检验,P均0.05);CDB-HP与CDB-PVP体外累计溶出度进行统计学比较,CDB-HP在提高溶出度方面更具优势(P0.05)。2.CDB在HP-β-CD和PVP作用下晶型结构发生显著变化。(1)IR结果显示,CDB-HP和CDB-PVP的羟基峰均发生了位移,且强度显著降低,在相应的扫描范围内吸收峰均有显著变化。(2)DSC结果显示,CDB-HP和CDB-PVP的热稳定性良好,其放热峰随着载体材料的比例变大而降低。(3)X射线衍射表征结果显示,CDB-HP和CDB-PVP特征峰均有不同程度的减弱甚至消失,证明龙血竭与载体材料包合作用发生,形成络合物。3.龙血竭在不同溶剂条件下(p H1.2、2.0、4.0、6.8、7.4及水中)总黄酮的溶解度不同。(1)龙血竭中总黄酮的含量为341.271mg/g。(2)龙血竭在pH1.2、2.0、4.0、6.8、7.4及水中总黄酮的溶解度分别为1.481、1.181、2.712、1.444、1.152和2.106mg/mL。(3)CDB-βCD(1:6、1:12、1:18)中总黄酮的溶解度分别为1.414、0.997、1.187mg/m L;CDB-HP(1:6、1:12、1:18)中总黄酮的溶解度分别为0.844、3.369、2.194mg/mL;CDB-PVP(1:2、1:4、1:6.5、1:9)中总黄酮的溶解度分别为0.540、0.722、5.622、4.023mg/mL。4.CDB及CDB-PVP对食蟹猴收缩压、舒张压、血小板以及活化凝血酶原时间(APTT)均有影响。(1)血压方面,给药后CDB高剂量组各周食蟹猴收缩压降低明显(P0.01),CDB-PVP组仅在给药第3w对食蟹猴收缩压有降低作用(P0.05),CDB低剂量组未显示降低收缩压的作用(P0.05);CDB高剂量组给药后各周对食蟹猴舒张压同样有降低作用(P0.05),CDB低剂量组、CDB-PVP组没有降低舒张压作用(P0.05)。(2)血小板计数方面,CDB高剂量组给药后第3、4w和CDB-PVP组给药后第4w显示出对血小板有抑制作用(P0.05),其余组未显示抑制血小板作用(P0.05)。(3)活化部分凝血活酶时间(APTT)方面,CDB高低剂量组、CDB-PVP组均对APTT具有缩短作用(P0.05)。【结论】1.通过采用环糊精包合技术及固体分散体技术,成功提高CDB中龙血素B为代表的难溶性成分的溶解度及体外溶出度。2.在提高CDB有效成分龙血素B溶解度方面,固体分散体优势更明显,而环糊精包合技术提高溶出度效果更好。3.将龙血竭制成龙血竭β-CD包合物、龙血竭HP-β-CD包合物和龙血竭PVPk30固体分散体后,总黄酮的溶解度提高。龙血竭在不同溶剂条件下(pH1.2、2.0、4.0、6.8、7.4及水中)总黄酮的溶解度不同。4.CDB对原发性高血压具有降压作用,抑制高血压状态下的血小板聚集,缩短高血压状态下APTT。5.提高CDB溶解性能,可提高上述药效,且与给药剂量呈正相关。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R283.6;R285.5
【图文】：

龙血素B,专属性,环糊精,甲醇

b 为 CDB-HP，c 为 HP-β-CD，d 为β-CD，e 为空白溶剂（甲醇）图 1 龙血素 B 与环糊精专属性（2）分别取 CDB 对照品溶液、PVPK30、甲醇、CDB-PVP 溶液，按2.2.1.1 色谱条件下测定，结果如图 2 所示，各组分间无任何干扰，保留时间 17.5 分钟。PVP-K30 在此条件下，不干扰测定。

龙血素B,专属性,甲醇

b 为 CDB-HP，c 为 HP-β-CD，d 为β-CD，e 为空白溶剂（甲醇）图 1 龙血素 B 与环糊精专属性别取 CDB 对照品溶液、PVPK30、甲醇、CDB-P条件下测定，结果如图 2 所示，各组分间无任何钟。PVP-K30 在此条件下，不干扰测定。

【参考文献】