肺癌Ⅰ号方对Lewis肺癌小鼠癌细胞凋亡相关蛋白表达的实验研究

发布时间：2020-06-29 22:35

【摘要】：【目的】本研究选取Lewis肺癌小鼠为实验动物模型,肺癌Ⅰ号方为实验药物,运用免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹法检测小鼠肿瘤组织中Fas、Fas L、Caspase-8、Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达情况,探讨其抗肿瘤机制,为肺癌Ⅰ号方临床应用提供实验依据。【方法】复制异位移植肺癌小鼠,将构建成功的48只模型小鼠按照随机数字法分为以下四组:模型组、肺癌Ⅰ号方组、顺铂组和联合用药组(顺铂+肺癌Ⅰ号方)。除模型组外,其余三组均为用药组。模型组每日生理盐水灌胃一次,生理盐水每三日腹腔注射一次;肺癌Ⅰ号方组每日肺癌Ⅰ号方灌胃一次,生理盐水每三日腹腔注射一次;顺铂组每日生理盐水灌胃一次,顺铂每三日腹腔注射一次;联合用药组每日肺癌Ⅰ号方灌胃一次,顺铂每三日腹腔注射一次。实验期间密切监测小鼠生理状态,12天后行颈椎脱臼处死,取出肿瘤组织,清洗血块后,称取其重量并计算得出抑瘤率。HE染色行组织病理学观察,免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹法检测肿瘤组织中Fas、Fas L、Caspase-8、Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。实验所得数据以均数±标准差((?)±s)表示,运用SPSS 20.0统计软件,实验结果选择单因素方差分析。【结果】1.小鼠生存质量观测:各用药组与模型组相比,小鼠活动量和饮食量均增加。三组实验组相比,联合用药组的小鼠生存状态最优,肺癌Ⅰ号方组次之,顺铂组最差。2.瘤重与抑瘤率测定结果:2.1瘤重:各用药组平均瘤重均低于模型组,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。各用药组相比,顺铂组平均瘤重低于肺癌Ⅰ号方组,有明显差异,呈统计学意义(P0.05);联合用药组平均瘤重低于顺铂组,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。2.2抑瘤率:联合用药组抑瘤率40.1%,效果最佳;顺铂组抑瘤率28.5%,效果次之;肺癌Ⅰ号方组抑瘤率15.2%,效果最弱。3.组织病理学观测结果:与模型组相比,各用药组肿瘤细胞密集程度降低,细胞水肿显著,坏死区域增加,坏死面积较大,坏死结构多为片状。各用药组之间比较,联合用药组坏死区域最多,细胞水肿最为明显。顺铂组与肺癌Ⅰ号方组相比,坏死区域较大,坏死面积较广,细胞水肿程度也更加显著。4.免疫组织化学法检测结果显示:与模型组相比,各用药组均可升高肿瘤组织中Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的阳性表达并降低Bcl-2阳性表达,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。与肺癌Ⅰ号方组相比,顺铂组和联合用药组Fas L、Bax、Caspase-3的阳性表达升高,Bcl-2的阳性表达降低,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。顺铂组Fas和Caspase-3的阳性表达虽较肺癌Ⅰ号方组有所升高,但差异没有统计学意义(P0.05);联合用药组Fas和Caspase-8的阳性表达较肺癌Ⅰ号方组增加,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。与顺铂组相比,联合用药组Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的阳性表达增加,Bcl-2的阳性表达降低,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。5.蛋白质免疫印迹法检测结果显示:与模型组相比,各用药组均可升高肿瘤组织中Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的蛋白相对表达量并降低Bcl-2蛋白相对表达量,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。与肺癌Ⅰ号方组相比,顺铂组和联合用药组Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的蛋白相对表达量升高,有明显差异,呈统计学意义(P0.05);顺铂组Fas的蛋白相对表达量虽较肺癌Ⅰ号方组升高,但差异没有统计学意义(P0.05);联合用药组Fas蛋白相对表达量较肺癌Ⅰ号方组升高,有明显差异,呈统计学意义(P0.05);联合用药组Bcl-2蛋白相对表达量较肺癌Ⅰ号方组降低,有明显差异,呈统计学意义(P0.05);顺铂组Bcl-2蛋白相对表达量较肺癌Ⅰ号方组降低,但差异没有统计学意义(P0.05)。与顺铂组相比,联合用药组Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的蛋白相对表达量升高,Bcl-2的蛋白相对表达量降低,有明显差异,呈统计学意义(P0.05)。【结论】1.肺癌Ⅰ号方能够升高Lewis肺癌小鼠癌细胞Fas、Fas L和Caspase-8表达,提示肺癌Ⅰ号方抗癌机制可能与调控死亡受体凋亡途径,进而促进肺癌细胞凋亡有关。2.肺癌Ⅰ号方能够升高Lewis肺癌小鼠癌细胞Bax和Caspase-3表达,降低Bcl-2的表达,提示肺癌Ⅰ号方抗癌机制可能与调控线粒体凋亡途径,进而促进肺癌细胞凋亡有关。3.肺癌Ⅰ号方或顺铂单独使用与二者联合用药相比,肺癌Ⅰ号方与顺铂联合应用在升高Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3表达,降低Bcl-2表达方面,比单独使用肺癌Ⅰ号方或顺铂效果更好,提示肺癌Ⅰ号方与化疗药物顺铂联合应用时疗效增强。结合前期实验结果分析,肺癌Ⅰ号方联合顺铂具有较强的抑瘤作用,但其在临床中与化疗药或靶向药的安全性尚不明确,今后实验中需加入本方与化疗药和靶向药的毒副反应研究,对于进一步推广上临床具有一定的实际意义。
【学位授予单位】：云南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

生存质量

3.1 生存质量观测随着实验时间的的延长，模型组小鼠肿瘤与各实验组小鼠肿瘤可见持续性增长，小鼠食欲逐渐减退，出现明显的活动性障碍，反应灵敏度降低，精神状态下降，毛色光泽度较差。与实验组移植瘤小鼠相比，模型组小鼠肿瘤生长速度较快，精神状态萎靡，喜欢聚集蜷缩在一起，活动逐渐减少，反应灵敏度差，饮食量减少，毛色光泽度差且毛发较为稀疏。肺癌 Ⅰ 号方组小鼠在饮食量、活动性、反应灵敏度、精神状态以及毛色光泽度方面均优于模型组。顺铂组小鼠移植瘤未见明显影响小鼠活动性，喜欢聚集蜷缩，活动较肺癌 Ⅰ号方组小鼠减少，饮食量较联合用药组减少，毛色光泽度较差，体温用手触之较凉。联合用药组小鼠在活动性、反应灵敏度、毛色光泽度以及饮食量等方面都要明显优于模型组、顺铂组和肺癌 Ⅰ 号方组，且体温触之温暖。

瘤重,抑瘤率,顺铂,肺癌

3.2 瘤重与抑瘤率测定结果3.2.1 瘤重：各组的瘤重与抑瘤率结果见表2和图3。其中模型组平均瘤重6.91±0.76g、肺癌 Ⅰ 号方组平均瘤重5.86 0.65g、顺铂组平均瘤重4.94 0.64g、联合用药组平均瘤重4.10 0.39g。以模型组小鼠平均瘤重作为比较对象，肺癌 Ⅰ 号方组、顺铂组和联合用药组平均瘤重均低于该组，有明显差异，呈统计学意义（P<0.05）；

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