胡椒碱脂质体的制备及通过RDP介导对脑缺血大鼠的脑保护作用及机制研究

发布时间：2020-06-30 01:53

【摘要】：胡椒(Piperis Fructus)为常用中药,含胡椒碱、胡椒脂碱、胡椒新碱等。胡椒碱化学结构属于桂皮酰胺类。已有研究证明,这类化合物具有治疗脑缺血、抗炎、镇静等作用,但它难溶于水,在体循环中容易被代谢,吸收效率低,难以发挥良好的治疗效果。使用脂质体包裹胡椒碱能够突破胡椒碱在体内作用的限制,脂质体由封闭的双层囊泡组成,可以保护药物不受外界环境的影响,稳定的脂质双层可以抵抗血浆蛋白的侵袭和减少药物泄漏,避免药物降解,降低不良反应,延长药物在体内的循环时间。脂质体由于其纳米尺寸,释放持续性,良好生物相容性和生物降解性等独特的性质,被广泛用于生物医学研究中,特别是在纳米医学中作为活性物质的载体,改变了许多疾病的治疗方法。RDP(rabies virus glycoprotein-derived peptide,RDP)为狂犬病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)的衍生肽。通过改造RVG位于第189~214位及第330~357位具有嗜神经性作用的的肽段,获得可以靶向中枢神经系统、无免疫原性的RVG衍生肽段RDP,这种衍生肽保留了RVG的嗜神经性,在体外和体内均显示出靶向神经细胞的作用,具有将外源大分子化合物转运入脑的潜在功能。通过利用RVG衍生物一系列性质,能够将药物输送到中枢神经系统(central nervous system,CNS)治疗一系列脑部疾病。大脑中动脉缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型是研究脑缺血病理学的常见动物模型。本课题通过将具有治疗脑缺血作用的胡椒碱包裹在脂质体内,选取多肽RDP作为配体靶向脑组织,制备了具有脑靶向作用的长循环胡椒碱脂质体,并检测了普通胡椒碱脂质体和RDP介导的胡椒碱脂质体的粒径大小及Zeta电势、包封率(encapsulation efficiency,EE%)和稳定性等基本理化性质。通过实验结果可知,RDP修饰后的胡椒碱脂质体(RDP-Piperine-Liposomes,RDP-PIP-L)平均粒径为(115.39±4.29)nm,包封率为(81.84±1.84)%,普通胡椒碱脂质体(Piperine-Liposomes,PIP-L)平均粒径(87.05±1.76)nm,包封率为(81.17±0.46)%,且重现性、稳定性良好。体外释放实验考察了PIP-L和RDP-PIP-L的释药情况,通过实验结果可知,RDP-PIP-L相比PIP-L具有更好的缓释作用。采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),向SD大鼠尾静脉注射PIP-L、RDP-PIP-L,于0.25、0.5、1、2、4、6、10、12、24h分别取出大鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑,检测胡椒碱在六个组织中的分布,通过实验结果可知,PIP-L和RDP-PIP-L在各组织脏器中的分布具有明显的差异,同时,RDP-PIP-L表现出优异的靶向脑组织的能力。使用RDP介导的胡椒碱脂质体治疗雄性SD大鼠的脑缺血,术后1小时给药,给药量30 mg/kg,每日2次,连续2天,尾静脉注射。观察到模型组SD大鼠脑缺血平均体积为48.57%,PIP-L组SD大鼠脑缺血平均体积为39.42%,RDP-PIP-L组SD大鼠脑缺血平均体积为16.17%。结果表明,RDP-PIP-L与PIP-L相比能够有效减少脑缺血体积,表现出明显的治疗作用。从结果来看,发现RDP介导的胡椒碱脂质体更有利于减轻MCAO大鼠脑缺血症状,显着提高了脑缺血大鼠的认知能力,减小了大脑梗死体积和含水量,降低了丙二醛浓度,通过上调谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶水平,以及抑制缺血大脑中活性氧的产生,提高了抗氧化能力。总之,本课题研究了RDP介导的胡椒碱脂质体对大鼠脑缺血的神经保护作用和潜在机制。胡椒已被确定为具有神经保护功能的天然药物。因此,该课题可能为胡椒碱的新剂型治疗缺血性脑损伤提供新的见解。
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283.6;R285.5
【图文】：

曲线,胡椒碱,曲线,模拟线

第 2 章胡椒碱体外含量的测定及包封率方法的建立2.3.2 标准曲线的绘制将一系列浓度为 0.5、1、10、20、50、80、100 μg/mL 胡椒碱标准溶液，H法进样测定，如表 2-1 与如图 2-2，横坐标为胡椒碱浓度（c），纵坐标为峰面积（A 对 c 模拟线性方程，得：y = 76627x 56842，R2= 0.9969，P<0.0001；结果显表 2-1Tab 2-1 Result of determination piperine standard curvec/(μg/mL) 0.5 1 10 20 50 80 100A 36812 66178 680468 1413267 3592117 6404377 7446853

胡椒碱,包封率,制备方法,脂质体

西南大学硕士学位论结果碱脂质体制备方法考察结果E%为指标，考察薄膜水化法、乙醇注入法、冻融法三种制备封率，结果如表 3-1，图 3-1 所示表 3-1 胡椒碱脂质体三种制备方法包封率的实验结果(n=3)Tab 3-1 The EE% of piperine liposome in three methods（n=3）乙醇注入法薄膜水化法冻融法 37.41±1.05 68.06±1.55 41.372.81 2.28 4

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