紫苏叶水提物对阿霉素诱导HK-2细胞氧化损伤的保护及机制研究

发布时间：2020-07-04 10:19

【摘要】：目的:探讨在阿霉素(ADR)诱导HK-2人肾小管上皮细胞发生氧化损伤后,紫苏叶水提取物(PFAE)对其细胞活性、氧化损伤标记物及细胞凋亡等关键因子的影响。方法:ADR刺激HK-2细胞建立损伤模型,筛选紫苏叶不同溶剂提取物对细胞活性的影响,选择最佳溶剂提取物PFAE进行后续实验。使用阳性药物N-乙酰半胱氨酸(NAC)或不同浓度PFAE(5,15,45 g·L~(-1))干预后,采用细胞增殖/毒性检测(CCK-8)法检测细胞存活率,结合光镜下细胞形态变化,筛选出PFAE保护细胞的最佳浓度。后续实验分为6组:空白组,ADR(0.05 g-L~(-1))组,PFAE(15 g·L~(-1))组,ADR+PFAE(0.05+15 g·L~(-1))组,NAC(0.81 g·L~(-1))组,ADR+NAC(0.05+0.81 g·L~(-1))组。检测细胞匀浆中的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和细胞总抗氧化能力,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TUNEL)染色法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞线粒体凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9和3(Caspase-9,Caspase-3)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)包括其剪切体的表达,检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK),c-Jun氨基端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白的表达。结果:①与空白组比较,ADR组的细胞活性显著降低(P0.01),与ADR组比较,5,15 g.L~(-1)的PFAE和NAC能促进细胞的增殖(P0.01),其中浓度为15 g·L~(-1)时保护作用最明显。②与空白组比较,ADR组抗氧化能力和SOD水平显著降低(P0.01),MDA和ROS的水平显著增高(P0.01),与ADR组比较,ADR+PFAE组和ADR+NAC组抗氧化能力和SOD水平显著升高(P0.01),MDA和ROS的水平显著下降(_P0.01)。③与空白组比较,ADR组细胞凋亡率上升(P0.01),凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2,cleaved Caspase-9/Caspase-9,cleaved Caspase-3/Caspase-3,cleaved PARP/PARP水平显著上升(P0.01),MAPKs通路中的p38 MAPK,ERK和JNK的磷酸化蛋白表达明显增高(P0.01,P0.01,P0.05);与ADR组比较,PFAE或NAC干预后减轻了细胞凋亡率,降低了凋亡蛋白的相对比值,并且抑制了MAPK信号通路中p38 MAPK,ERK蛋白的磷酸化(P0.01),但对磷酸化的JNK蛋白表达无影响。结论:PFAE可以减轻ADR诱导的HK-2细胞氧化损伤,并发挥抗氧化作用,通过线粒体凋亡途径和ERK/p38 MAPK信号通路来抑制细胞凋亡。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

细胞活性逐渐下降（尸均＜０．０１邋）。当ＡＤＲ刺激２４ｈ、浓度为０．０５邋ｇ‘１／１时，ＨＫ－２逡逑细胞活性在５３．９２％左右，本研究选用此浓度作为后续ＡＤＲ诱导ＨＫ－２细胞损伤模型的剂逡逑量。见图１－１－１。逡逑２２逡逑

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本文编号：2740999