蛎昆一号抑制人结肠癌细胞HCT-116增殖及其对5-Fu诱导小鼠骨髓抑制损伤保护作用的实验研究

发布时间：2020-07-05 21:31

【摘要】：目的:探讨蛎昆一号抑制人结肠癌细胞HCT-116增殖及其对5-Fu诱导小鼠骨髓抑制损伤保护作用与作用机制。方法:(1)采用不同浓度(0.25、0.5、1、2、4mg/ml)蛎昆一号处理人结肠癌细胞HCT-116,CCK8法检测HCT-116细胞增殖情况,流式细胞术检测HCT-116细胞凋亡率,Western blot检测HCT--116凋亡相关蛋白Bax、Bad、Bcl-2、Akt、caspase3表达;(2)60只纯系雄性BALB/c小鼠,随机分为正常对照组(Control)、5-Fu组(Model)、重组人粒细胞集落刺激因子组(rhG-CSF)、蛎昆一号制剂低、中、高剂量组(133、200、300mg/kg)。腹腔注射5-Fu(250mg/kg)复制小鼠骨髓抑制模型,对照组注射等容积生理盐水;注射后第2天,灌胃给予不同剂量的蛎昆一号,正常组和模型组灌胃给予等容积的生理盐水,阳性对照组腹腔注射rhG-CSF(250μg/kg),连续给药7天。每天观察小鼠的一般状况(毛发,饮食,活动,是否腹泻等),在实验结束时,眼眶采血,骨髓涂片,颈椎脱臼法处死小鼠,解剖取脾脏冻存于-80℃冰箱,用于后续的实验。采用全自动血细胞分析仪,计数外周血细胞(WBC、PLT、LY、MO%);ELISA法检测血清TNF-α、IL-2的含量;Western blot法检测脾脏组织JAK2、STAT5、p-JAK2、p-STAT5蛋白表达。结果:(1)不同浓度蛎昆一号处理HCT-116细胞48h,各浓度显著抑制结肠癌细胞HCT-116增殖(P0.01),1mg/ml蛎昆一号处理不同小时,24h时抑制其增殖(P0.05),时间延长,显著抑制其增殖(P0.01),2mg/ml、4mg/ml促进其凋亡(P0.05),蛎昆一号显著性上调Bax、Bad、caspase-3蛋白的表达(P0.05),2mg/ml、4mg/ml显著下调Bcl-2、Akt、p-Akt蛋白的表达(P0.01);(2)与正常对照组比较,模型组小鼠体重显著性下降(P0.05),且均出现腹泻症状(P0.05),骨髓涂片结果显示,模型组小鼠骨髓增生极度低下,外周血白细胞、血小板、淋巴细胞的数量显著性减少(P0.05),单核细胞比率显著性升高(P0.05),TNF-α的含量显著性升高(P0.05),IL-2的含量显著性下降(P0.05),脾脏组织中p-JAK2、p-STST5蛋白表达明显下降(P0.05);与模型组比较,蛎昆一号低剂量组体重减轻症状明显改善(P0.05),能够显著改善5-Fu引起的腹泻症状,骨髓涂片结果显示,给予不同剂量的蛎昆一号后,增生程度有所改善,血常规检测结果显示,蛎昆一号低剂量组小鼠白细胞、淋巴细胞均有不同程度的升高(P0.05),单核细胞比率降低(P0.05),中、高剂量显著升高白细胞、淋巴细胞和血小板数(P0.01),降低单核细胞比率(P0.01),蛎昆一号各剂量组小鼠血清TNF-α的水平显著下降(P0.01),中、高剂量组IL-2的水平升高(P0.05),Western blot结果显示,蛎昆一号中、高剂量组能够显著上调p-JAK2、p-STAT5的表达(P0.05)。结论:(1)蛎昆一号能抑制结肠癌细胞HCT-116细胞增殖,可能是通过上调Bax、Bad、cleaved caspase-3蛋白,下调Bcl-2、Akt、p-Akt蛋白,促进细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用(2)蛎昆一号能够缓解5-Fu所致小鼠的腹泻症状,减轻5-Fu所致骨髓抑制损伤,其机制可能是通过上调p-JAK2、p-STAT5蛋白的表达,减轻TNF-α的释放,增加IL-2的含量来实现的。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1 蛎昆一号对 HCT-116 细胞活力的影响（ x±S，n=5Fig1 Li kun No.1 inhibited cell viablitity( x±S，n=5）抑制结肠癌细胞 HCT-116 增殖。用 0.25，0.5，1，2 或 4mg/m

图 2 蛎昆一号对 HCT-116 细胞活力的影响（ x±S，n=Fig2 Li kun No.1 inhibited cell viablitity( x±S，n=5）抑制结肠癌细胞 HCT-116 增殖。1mg/ml 干预细胞 0 至 96h，＜0.01

图 3 蛎昆一号对 HCT-116 细胞凋亡的影响（ x±S，n=5）Fig3 Li kun No.1 induced apoptosis ( x±S，n=5）：蛎昆一号诱导结肠癌细胞 HCT-116 凋亡，与对照组比较：*P＜0.053 蛎昆一号对人结肠癌细胞 HCT-116Bax、Bad、Bcl-2 的影响

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本文编号：2743150