雷公藤不同时间给药对胶原诱导关节炎大鼠肝功能损伤的探讨

发布时间：2020-07-08 14:16

【摘要】：目的探讨昼夜不同时辰应用雷公藤多苷对胶原诱导关节炎大鼠(CIA)肝功能的影响及其相关机制,同时观察其对CIA大鼠关节影像学的治疗作用,为雷公藤多苷对类风湿关节炎的时间治疗提供时间毒理学证据。方法Wistar大鼠96只,雌性,体重180±20g。将Wistar大鼠置于时间生物学实验室,固定光照(L)∶黑暗(D)时间(L:D=12:12,明期为07:00~19:00,暗期为19:00~07:00),室温23±2℃,相对湿度为60±10%,自由摄食饮水,适应10d后进行实验。将96只大鼠随机分为:正常对照组16只、模型组80只。分组后建立CIA模型(除正常对照组外),在初次免疫第21天观察并评价造模结果,将造模成功大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤多苷组(TG组)、雷公藤多苷+白芍总苷组(TG+TGP组)。TG组与TG+TGP组再按照大鼠药物干预时间随机分为ZT6组与ZT18组两个亚组。分组完成后进行给药干预,给药干预第1天开始对TG组(40mg/kg/d)、TG+TGP组(TG40mg/kg/d、TGP200mg/kg/d)CIA大鼠进行灌胃,正常对照组与模型组均以等量生理盐水灌胃,均为1/日,持续给药42天。于处死前1天,用X线机对大鼠踝、足关节进行拍片,并进行影像学观察和分析。给药结束后,分6个时间点取血、留取肝脏及病变关节。检测所采血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、还原型谷胱甘肽(GSH Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)表达水平;免疫组化法检测滑膜细胞中滑膜细胞中白介素 6(IL 6)、白介素 18(IL 18)、时钟基因CLOCK及BMAL1表达水平;HE染色法对大鼠肝脏及关节组织进行病理学检查。各组正态分布计量资料数据均采用均数±标准差((?)±s)表示。组间差异采用多样本均数的方差分析进行判断,两两均数比较采用t检验进行判断。使用SPSS21.0软件统计分析,检验水准α=0.05。结果1 CIA大鼠肝功能及血清SOD、GSH Px、TNF α水平的变化:与正常对照组相比,模型组血清ALT、AST水平及SOD活力、GSH Px含量均未显示出明显差异(P0.05),模型组TNF α含量则显著高与正常对照组(P0.05)。时间治疗组持续给药42天后,TG组与TG+TGP组血清ALT、AST水平均明显高于正常对照组与模型组(P0.05);TG组与TG+TGP组血清SOD活力、GSH Px含量明显低于正常对照组与模型组(P0.05)。与模型组相比,TG组与TG+TGP组血清TNF α含量均下降(P0.05),TG+TGP组血清TNF α含量明显低于TG组(P0.05)。与TG组相比,TG+TGP组血清ALT、AST水平显著降低(P0.05),血清SOD活力、GSH Px含量显著升高(P0.05)。与TG ZT6组相比,TG ZT18组血清ALT、AST水平较低,SOD活力、GSH Px含量较高,TNF α含量较低(P0.05);与TG+TGP ZT6组相比,TG+TGP ZT18组血清ALT、AST水平较低,SOD活力、GSH Px含量较高,TNF α含量较低(P0.05)。2 CIA大鼠肝功能及血清SOD、GSH Px、TNF α水平的昼夜节律:各组大鼠血清学指标均显示出一定的节律变化,ALT、AST大致呈现出昼低夜高的趋势,SOD与GSH Px则显示出昼高夜低的趋势。其中ALT的峰值出现在ZT18时,谷值出现在ZT6时;AST峰值于ZT14时达到峰值,谷值则出现于ZT22时;SOD活力的峰值出现于ZT6时,谷值出现在ZT18时,变化趋势与ALT波动趋势大致相反;GSH Px于ZT2时达到峰值,谷值出现在ZT14时。空白组大鼠TNF α含量的昼夜变化浮动较小,模型组及TG组、TG+TGP组大鼠TNF α变化波动较大,峰值出现在ZT22时,于ZT14时达到谷值。3昼夜不同时间应用TG及TGP对CIA大鼠关节影像学的影响:通过X线可观察到正常组大鼠踝关节关节面清晰,跖趾关节骨皮质完整,各关节间隙未见异常;CIA模型组大鼠踝关节关节面模糊,骨缺损明显,跖趾关节可见大块骨缺损,趾间关节融合严重。与模型组相比,TG时间治疗组关节病变程度显著减轻。TG ZT6组大鼠踝关节关节面模糊,可见踝关节关节缺损面,跖趾关节可见骨缺损,趾间关节轻度融合;TG ZT18组大鼠踝关节关节面较清晰,跖趾关节骨破坏较轻,关节间隙轻度改变。与TG组相比,TG与TGP联合给药组关节病变程度较轻。TG+TGP ZT6组大鼠踝关节关节面较清晰,但仍可见少量骨缺损,关节间隙稍窄;TG+TGP ZT18组大鼠踝关节关节面较清晰,跖趾关节及关节间隙未见明显异常改变。4昼夜不同时间应用TG及TGP对CIA大鼠肝脏病理学的影响:正常对照组肝细胞大小一致、结构完整,均匀而规则的排列,无肝细胞变性和坏死,肝小叶结构完整。与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏病理未见明显异常。TG ZT6组大鼠肝细胞水肿变性严重,部分细胞核溶解分散,肝小叶结构破坏,有多处点灶状坏死,肝窦变宽且有炎性细胞;TG ZT18组大鼠肝细胞水肿、脂肪变,轻度炎细胞浸润,肝小叶轻度破坏,部分可见片状坏死区,可观察到间质纤维组织增生。TG+TGP ZT6组大鼠肝细胞轻度水肿,偶有脂肪变,肝小叶结构基本正常,偶有炎性细胞浸润,轻度间质纤维化;TG+TGP ZT18组大鼠肝细胞未见明显水肿变性,与正常组大鼠对比,肝窦稍宽,偶可见炎性细胞。5昼夜不同时间应用TG及TGP对CIA大鼠关节病理学的影响:通过HE染色观察发现,正常对照组大鼠踝关节滑膜面平滑,未见乳突状突起及增生,无多核细胞浸润;CIA模型组大鼠踝关节滑膜细胞增生严重,可见数层滑膜细胞堆积,滑膜边缘可见乳突状凸起及大量炎性细胞浸润。与模型组相比,TG时间治疗组关节病变程度显著减轻。TG ZT6组大鼠踝关节也可见乳突状凸起及滑膜细胞增生、炎性细胞浸润;TG ZT18组大鼠踝关节滑膜增生较轻,仍可见乳突状凸起及少量炎性细胞浸润。与TG组相比,TG与TGP联合给药组关节病变程度较轻。TG+TGP ZT6组大鼠踝关节滑膜细胞增生较轻,少量乳突状凸起,炎性细胞浸润;TG+TGP ZT18组大鼠踝关节滑膜较光滑,未见明显增生及乳突状凸起,少量炎性细胞浸润。6昼夜不同时间应用TG及TGP对CIA大鼠关节IL 6、IL 18及钟基因CLOCK、BMAL1表达的影响:模型组、TG时间治疗组及TG与TGP联合给药组中IL 6、IL 18及钟基因CLOCK、BMAL1的表达均高于空白组;与模型组相比,TG时间治疗组、TG与TGP联合给药时间治疗组中IL 6、IL 18及钟基因CLOCK、BMAL1的表达均明显降低;TG时间治疗组、TG与TGP联合给药时间治疗组中ZT18组IL 6、IL 18及钟基因CLOCK、BMAL1的表达明显低于ZT6组。结论1 CIA大鼠肝功能、肝脏病理学与正常大鼠相比无明显异常变化;TG可导致CIA大鼠肝功能及肝脏病理学不同程度的损伤。2正常对照组与CIA模型组大鼠血清ALT、AST、SOD、GSH Px显示出一定的昼夜节律;TG对CIA大鼠肝功能指标的影响也具有昼夜变化,ZT18给药组(夜间给药)较ZT6给药组(白天给药)肝功能损伤为轻;TGP显示出对TG所致CIA大鼠肝损伤的保护作用。3 TG组及TG、TGP联合给药组对CIA大鼠关节损伤、血清TNF α水平均具有显著抑制作用,并显示出一定的昼夜变化,夜间给药的效果更佳。4 TG致CIA大鼠肝损伤及其对CIA大鼠关节保护作用的昼夜差异,可能与其影响生物钟基因CLOCK、BMAL1的表达等有关。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

实验组

各实验组ALT水平Fig.1TheALTlevelofeachexperimentalgroup

实验组

各实验组AST水平Fig.2TheASTlevelofeachexperimentalgroup

实验组,SOD活力,活力

各实验组SOD活力Fig.3TheSODactivityofeachexperimentalgroup

【参考文献】